一种新的内皮细胞可诱导性粘附分子的表达调变及功能研究
发布时间：2022-01-26 11:26
血小板／T细胞活化抗原1（platelet and T cell activation antigen 1，PTA1）是1997年基因克隆的新分子，属于免疫球蛋白超家族（IgSF）成员，胞膜外区含有2个免疫球蛋白V样结构域，表达于活化T淋巴细胞、NK细胞和巨核细胞／血小板表面。IL-2、TNF-α、佛波酯（PMA）和PHA对PTA1的表达有上调作用，TGF-β有下调作用。PTA1单抗可以诱导血小板活化和聚集。在混合淋巴细胞培养初期加入PTA1单抗可抑制CTL的分化，同时降低NK细胞的杀伤活性。PTA1分子表达与疾病相关性的研究表明，PTA1在移植物抗宿主病、肾综合征出血热、尖锐湿疣患者PBMC、胃癌浸润淋巴细胞及桥本氏甲状腺炎浸润T细胞中有较高水平的表达，提示PTA1与某些感染性疾病、移植排斥反应、肿瘤及自身免疫性疾病的发生有关。PTA1配体（PTA1L）分布于活化T淋巴细胞、Jurkat细胞、Colo205结肠癌细胞系以及某些黑色素瘤细胞等。鉴于此，本室已向第七届国际白细胞分化抗原专题会议提出为PTA1分子申请新的CD编号。 实际上，CD分子分化中细胞谱系（lineage）的特...
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组质拉pGEM一3zF(+)一PATI的酶切鉴定.eneonoeon一+一
第四军医大学博士学位论文研究内容高辛精标记的NeoRcNA探针(10昭L/)进行杂交，结果呈蓝紫色，颜色的深浅与稀释度成正比(图1.4).交叉杂交:即将含有探针序列的重组质粒pGME一3zF+()一PATI和试剂盒中对照质粒PSPT18一Ne。分别与试剂盒中地高辛精标记的Ne。。NRA探针和本实验所标记的地高辛精TPAI。NRA探针进行杂交，未见明显的蓝紫色(结果未显示)，说明标记探针具有良好的特异性.根据阳性对照佑计，标记探针的总量约为10畔.4.原位杂交结果光镜下观察可见杂交反应标记的PTAlmRNA阳性细胞主要分布于人脾脏脾小体周边动脉周围淋巴鞘和胸腺小叶周边的胸腺皮质区，但在淋巴结中未见明显分布(图1.5一1.8).被标记的结构内均有蓝色或蓝黑色的杂交反应物沉着，与未标记的结构有明显区别.蓝色或蓝黑色的杂交反应物主要分布于胞质中，但在某些细胞的胞核中亦有分布.两种对照实验均未见特异性着色，说明本方法具有特异性.图1.2重组质拉pGEM一3zF(+)一PATI的酶切鉴定Figl.2IdentifieationofereombinnatPlasmidPGEM一3ZF(+)一PTAIbyersrtietione‘以medigestionl:入DNA尼eoRI
其中1条为750bp左右;用EcRoI也可以切成两条带，其中的小片段约为25b0p，所获结果与酶切图谱相符(图1.2).NDA序列测定证实，重组质粒中含有TPAI胞膜外区基因片段且插入方向正确(图1.3).2.PTAlcRNA探针的制备重组质粒pGEM一3ZF(+)一PTAI经EeoRI酶切后，用酚、氛仿抽提，乙醇沉淀回收可得到线状PTAI模板DNA(图1.2)。上述线性模板NDA片段，用地高辛精RcNA标记试剂盒进行cNRA探针体外转录和标记合成反应，得到的反应产物即为探针，其长度经计算为507Pb。3.斑点杂交将含有探针序列的重组质粒pGEM一3Fz(+)一PTAI和试剂盒中的对照质粒PSPT18一Ne。分别与地高辛精标记的PT人loRNA探针和试剂盒中地______47博士研究生:陈丽?
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠血小板/T细胞活化抗原1的表达分布与功能[J]. 李德敏,金伯泉,苏丽,贾卫,孙凯,刘雪松,张婷婷. 中华微生物学和免疫学杂志. 1999(03)
[2]PTA1单克隆抗体诱导人血小板活化聚集和胞浆Ca2+水平的升高[J]. 孙忱,金伯泉,刘雪松,杨琨,张婷婷,董邦权,李家增,武怀珠,彭林,包承鑫,武文杰. 中华血液学杂志. 1998(03)
[3]第六届国际人类白细胞分化抗原会议情况简介[J]. 沈德诚. 细胞与分子免疫学杂志. 1997(03)
[4]地高辛标记cDNA探针组织及细胞mRNA原位杂交技术[J]. 杜卫东,周晓虹,马学玲,吴浩,翟为溶,张月娥. 临床与实验病理学杂志. 1997(01)
[5]一种新的免疫球蛋白超家族成员PTA1的细胞分布及表达的研究[J]. 田方,金伯泉,姜绍谆,刘雪松,申立中,夏海滨. 细胞与分子免疫学杂志. 1996(04)
[6]地高辛精标记cRNA探针原位杂交法检测大鼠胃肠胰系统生长抑素mRNA[J]. 王瑞安,蔡文琴,姚钧,向正华,苏慧慈. 第四军医大学学报. 1995(04)
[7]HFRS患者PBMC和异型淋巴细胞多种活化标志表达的研究[J]. 黄传书,金伯泉,汪美先,李恩善. 上海免疫学杂志. 1991(02)
[8]自身免疫性甲状腺病浸润T细胞活化与滤泡细胞DR抗原表达[J]. 王坚,胡绍文,王伯云,金伯泉,黄高昇. 中华医学杂志. 1992 (02)
本文编号：3610411
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组质拉pGEM一3zF(+)一PATI的酶切鉴定.eneonoeon一+一
第四军医大学博士学位论文研究内容高辛精标记的NeoRcNA探针(10昭L/)进行杂交，结果呈蓝紫色，颜色的深浅与稀释度成正比(图1.4).交叉杂交:即将含有探针序列的重组质粒pGME一3zF+()一PATI和试剂盒中对照质粒PSPT18一Ne。分别与试剂盒中地高辛精标记的Ne。。NRA探针和本实验所标记的地高辛精TPAI。NRA探针进行杂交，未见明显的蓝紫色(结果未显示)，说明标记探针具有良好的特异性.根据阳性对照佑计，标记探针的总量约为10畔.4.原位杂交结果光镜下观察可见杂交反应标记的PTAlmRNA阳性细胞主要分布于人脾脏脾小体周边动脉周围淋巴鞘和胸腺小叶周边的胸腺皮质区，但在淋巴结中未见明显分布(图1.5一1.8).被标记的结构内均有蓝色或蓝黑色的杂交反应物沉着，与未标记的结构有明显区别.蓝色或蓝黑色的杂交反应物主要分布于胞质中，但在某些细胞的胞核中亦有分布.两种对照实验均未见特异性着色，说明本方法具有特异性.图1.2重组质拉pGEM一3zF(+)一PATI的酶切鉴定Figl.2IdentifieationofereombinnatPlasmidPGEM一3ZF(+)一PTAIbyersrtietione‘以medigestionl:入DNA尼eoRI
其中1条为750bp左右;用EcRoI也可以切成两条带，其中的小片段约为25b0p，所获结果与酶切图谱相符(图1.2).NDA序列测定证实，重组质粒中含有TPAI胞膜外区基因片段且插入方向正确(图1.3).2.PTAlcRNA探针的制备重组质粒pGEM一3ZF(+)一PTAI经EeoRI酶切后，用酚、氛仿抽提，乙醇沉淀回收可得到线状PTAI模板DNA(图1.2)。上述线性模板NDA片段，用地高辛精RcNA标记试剂盒进行cNRA探针体外转录和标记合成反应，得到的反应产物即为探针，其长度经计算为507Pb。3.斑点杂交将含有探针序列的重组质粒pGEM一3Fz(+)一PTAI和试剂盒中的对照质粒PSPT18一Ne。分别与地高辛精标记的PT人loRNA探针和试剂盒中地______47博士研究生:陈丽?
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠血小板/T细胞活化抗原1的表达分布与功能[J]. 李德敏,金伯泉,苏丽,贾卫,孙凯,刘雪松,张婷婷. 中华微生物学和免疫学杂志. 1999(03)
[2]PTA1单克隆抗体诱导人血小板活化聚集和胞浆Ca2+水平的升高[J]. 孙忱,金伯泉,刘雪松,杨琨,张婷婷,董邦权,李家增,武怀珠,彭林,包承鑫,武文杰. 中华血液学杂志. 1998(03)
[3]第六届国际人类白细胞分化抗原会议情况简介[J]. 沈德诚. 细胞与分子免疫学杂志. 1997(03)
[4]地高辛标记cDNA探针组织及细胞mRNA原位杂交技术[J]. 杜卫东,周晓虹,马学玲,吴浩,翟为溶,张月娥. 临床与实验病理学杂志. 1997(01)
[5]一种新的免疫球蛋白超家族成员PTA1的细胞分布及表达的研究[J]. 田方,金伯泉,姜绍谆,刘雪松,申立中,夏海滨. 细胞与分子免疫学杂志. 1996(04)
[6]地高辛精标记cRNA探针原位杂交法检测大鼠胃肠胰系统生长抑素mRNA[J]. 王瑞安,蔡文琴,姚钧,向正华,苏慧慈. 第四军医大学学报. 1995(04)
[7]HFRS患者PBMC和异型淋巴细胞多种活化标志表达的研究[J]. 黄传书,金伯泉,汪美先,李恩善. 上海免疫学杂志. 1991(02)
[8]自身免疫性甲状腺病浸润T细胞活化与滤泡细胞DR抗原表达[J]. 王坚,胡绍文,王伯云,金伯泉,黄高昇. 中华医学杂志. 1992 (02)
本文编号：3610411
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