Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶sirt1对间充质干细胞C3H10T1/2的成脂分化影响的研究

发布时间：2022-11-12 08:23

　　目的：分析Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶SIRT1对间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化的影响，探讨SIRT1参与间充质干细胞成脂分化过程的分子作用机制。 方法：1.建立成脂分化的体外模型，绘制C3H10T1/2细胞生长曲线，选择对数生长期细胞进行成脂分化诱导；RT-qPCR检测SIRT1的激动剂resveratrol和抑制剂EX-527对C3H10T1/2细胞中SIRT1表达的影响；并利用流式细胞术和MTT检测resveratrol和EX-527对C3H10T1/2细胞增殖活性和细胞周期的影响。2. Western blot检测C3H10T1/2细胞成脂分化过程中PPAR-γ水平的变化；RT-qPCR检测经由resveratrol和EX-527联合ADM处理C3H10T1/2后细胞中成脂分化关键转录因子表达的变化，分析SIRT1可能参与这一变化的作用机制。油红O染色及半定量检测成脂分化效果。 结果：1.成功建立了间充质干细的体外成脂分化模型；resveratrol处理后，C3H10T1/2细胞中SIRT1mRNA水平上表达上升，而由EX-527处理后C3H10T1/2细胞中SIR... 

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词
1 前言
    1.1 sirtuin 蛋白概述
    1.2 间充质干细胞概述
    1.3 sirt1 与细胞分化
    1.4 肥胖与成脂分化
    1.5 研究目的和意义
    1.6 研究技术路线
    1.7 论文创新点
2 实验材料与仪器
    2.1 实验细胞
    2.2 主要试剂
    2.3 本实验中所用的主要试剂配制方法
    2.4 主要实验仪器
3 实验方法
    3.1 细胞的培养
    3.2 绘制细胞生长曲线
    3.3 MTT 检测 resveratrol 和 EX-527 对细胞增殖的影响
    3.4 流式细胞术检测 resveratrol 和 EX-527 对细胞周期的影响
    3.5 验证间充质干细胞 C3H10T1/2 的多向分化潜能
    3.6 Western blotting 技术检测 resveratrol 和 EX-527 对成脂分化过程中细胞的PPAR-γ表达水平的影响
    3.7 油红 O 染色检测 resveratrol 和 EX-527 对 C3H10T1/2 细胞成脂分化的影响
    3.8 实时荧光定量 PCR 检测 resveratrol 和 EX-527 对 C3H10T1/2 细胞成脂分化的影响
    3.9 统计学分析
4 结果
    4.1 S 型的细胞生长曲线
    4.2 MTT 检测细胞增殖活性
    4.3 流式细胞术检测 C3H10T1/2 的细胞周期分布
    4.4 C3H10T1/2 具有多向分化潜能
    4.5 Western Blot 检测不同浓度的 resveratrol 和 EX-527 对 C3H10T1/2 细胞成脂分化关键转录因子 PPAR-γ的影响
    4.6 油红 O 染色检测两种药物对细胞成脂分化的影响
    4.7 RT-qPCR 检测成脂分化标志因子及关键转录因子的表达
5 讨论
    5.1 resveratrol 抑制 C3H10T1/2 细胞增殖并抑制其向成脂细胞分化
    5.2 HDAC 与成脂分化
    5.3 sirt1 通过影响 PPAR-γ在细胞中的表达水平来调节成脂分化
6 结论
参考文献
在校发表论文情况
致谢



本文编号：3706030