异种抗原neu-Fc联合GM-CSF/IFN-γ和BCG的抗肿瘤免疫效应

发布时间：2022-12-09 06:15

　　前言 人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2/neu）是表皮生长因子受体家族的第二号成员,是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜受体蛋白,在25%～30%的乳腺癌中过表达,在正常组织中低表达,是良好的肿瘤免疫生物治疗的靶分子。但HER2属自身蛋白,机体免疫系统对于过表达的自身蛋白往往处于耐受状态,此外肿瘤细胞在长期发展过程中在肿瘤局部形成了一个深度免疫抑制微环境,免疫细胞的作用在这个微环境中受到抑制。打破机体对肿瘤相关抗原的耐受、解除肿瘤局部的抑制状态、诱发有效的抗肿瘤免疫反应是肿瘤免疫治疗的关键。 目的 探讨异种抗原蛋白neu-Fc联合hGM-CSF和BCG的免疫调节作用;探讨异种抗原蛋白neu-Fc联合IFN-γ和BCG产生的抗肿瘤免疫效应。 方法 通过基因工程技术将大鼠neu L2-S2功能域与人IgG Fc区编码序列融合,构建真核表达载体;在CHO细胞中获得稳定表达,应用rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析纯化neu-Fc融合蛋白,应用SDS... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 异种抗原NEU-FC 联合HGM-CSF 和BCG 的免疫调节效应
    1 前言
    2 材料
        2.1 主要试剂
        2.2 主要溶液的配制
        2.3 主要仪器设备
    3 方法
        3.1 细胞培养
        3.2 PBMC 的分离与培养
        3.3 NEU-FC 的构建、表达及纯化
        3.4 NEU-FC 的鉴定
            3.4.1 SDS-PAGE 测定Neu-Fc 的分子量
            3.4.2 Western Blot 鉴定
        3.5 细胞增殖活性测定（MTT）
        3.6 细胞因子检测（ELISA）
        3.7 统计学分析
    4 结果
        4.1 MCF-7 细胞上清抑制PBMC 分泌IL-12 及刺激PBMC 分泌IL-10
        4.2 GM-CSF 和BCG 对PBMC 的刺激作用
        4.3 NEU-FC 的表达、纯化及促增殖作用分析
        4.4 NEU-FC、GM-CSF、BCG 联合作用对细胞因子分泌的影响
    5 讨论
    6 参考文献
第二部分 NEU-FC 联合IFN-Γ和BCG 的协同抗肿瘤作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 细胞培养
        2.2 NEU-FC 的构建以及表达、纯化和鉴定
        2.3 PBMC 和单核细胞的分离
        2.4 流式细胞分析
        2.5 细胞增殖实验( MTT )
        2.6 细胞因子分析
        2.7 杀伤实验（LDH 法）
            2.7.1 效应细胞的处理
            2.7.2 靶细胞的处理
            2.7.3 效靶作用
        2.8 稳定细胞株的构建
        2.9 动物实验
            2.9.1 第一批动物实验
            2.9.2 第二批动物实验
        2.10 统计学分析
    3 结果
        3.1 MCF-7 上清抑制PBMC 分泌IL-12 及刺激PBMC 分泌IL-10
        3.2 NEU-FC 和IFN-Γ可逆转肿瘤细胞对免疫细胞的影响
        3.3 BCG 能够显著提高TH1 类反应
        3.4 NEU-FC 和BCG、IFN-Γ联合诱导逆转单核细胞表型变化
        3.5 IFN-Γ上调T47D,、MCF-7 和MCF-7
        3.6 T47D、MCF-7 和MCF-7/HER2 细胞表面HER2 表达水平不同
        3.7 NEU-FC, IFN-Γ和BCG 诱导的特异性抗肿瘤应答
        3.8 EMT6/HER2 细胞株的建立
        3.9 NEU-FC、IFN-Γ和BCG 联合应用可抑制肿瘤细胞的体内生长
    4 讨论
    5 参考文献
第三部分 小结
第四部分 文献综述
    参考文献
主要缩略语
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]HER2/neu和GM-CSF共转染树突状细胞的免疫杀伤研究[J]. 唐三元,黄卫国,伍尤华,戴文香,江青山.  细胞与分子免疫学杂志. 2008(01)
[2]乳腺与乳腺癌[J]. 周雪瑞,黄选东.  生物学通报. 2004(07)
[3]酪氨酸激酶受体的信号转导途径与肿瘤治疗[J]. 朱孝峰,刘宗潮,曾益新.  药学学报. 2002(03)



本文编号：3714996