胰岛素对拟胚体神经相关基因Sox2、Fgf5、Pax6、Arx时序性表达的影响

发布时间：2023-01-12 13:05

　　目的： 了解不同浓度胰岛素对拟胚体（embryoid body, EB）神经系统发育相关基因时序性表达的影响。方法： 采用小鼠EB为研究对象,体外培养模拟胚胎早期发育,以60pM及6nM胰岛素进行干预,并分别于培养的第1、3、5、7、9、11天收集EB细胞；利用实时荧光定量PCR技术检测神经系统相关基因Sox2、Fgf5、 Pax6、Arx的时序性表达。 结果： 1.从形态学看,60pM组EB状态优于6nM组；60pM组EB第5天开始出现囊腔化趋势,第7天形成囊化腔；6nM组EB第7天才开始出现囊腔化趋势,且在整个实验过程中一直没形成囊化腔； 2.6nM胰岛素组EB的Sox2、Fgf5、Pax6、Arx的表达量均明显高于60pM组EB； 3.Sox2基因表达在2组EB第5天达到高峰,第11天同时降至最低； 4.Fgf5基因在2组EB前5天的表达量都很低,随后出现表达增加,60pM组第7天到达高峰,6nM组第7天明显升高,第9天到高峰,至11天2组表达同时下降至同一水平； 5.Pax6基因在6nM组中从第3天开始上升,第7天到达高峰,11天下调至最低水平,而在60pM组中... 

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要 Abstract 第1章 绪论 第2章 实验材料与方法
2.1 实验材料
    2.1.1 细胞系
    2.1.2 耗材
    2.1.3 试剂
    2.1.4 主要仪器
    2.1.5 培养基的配置
2.2 实验方法
    2.2.1 小鼠MEF细胞的培养
    2.2.2 制备饲养层细胞
    2.2.3 小鼠ES细胞的复苏及培养
    2.2.4 小鼠EB的形成、培养及胰岛素干预
    2.2.5 采用实时荧光定量PCR技术检测各组EB的基因表达差异 第3章 结果
3.1 拟胚体的生长形态
3.2 RNA电泳图
3.3 Real-timePCR检测结果
    3.3.1 标准曲线及产物溶解曲线
    3.3.2 实时扩增曲线图
    3.3.3 各样品目的基因相对定量结果
    3.3.4 各样品目的基因相对定量表达趋势图及结果分析 第4章 讨论
4.1 不同浓度胰岛素对Sox2表达的影响
4.2 不同浓度胰岛素对Fgf5表达的影响
4.3 不同浓度胰岛素对Pax6表达的影响
4.4 不同浓度胰岛素对Arx表达的影响
4.5 DNA甲基化与神经系统相关基因表达的关系 第5章 结论 参考文献 综述
参考文献 攻读学位期间主要的研究成果 致谢


【参考文献】：
硕士论文
[1]胰岛素对拟胚体多能性和分化相关标志基因启动子区域甲基化的影响[D]. 朱艳.中南大学 2012



本文编号：3729964