ToxoROP16 Ⅰ/Ⅲ 诱导M2型巨噬细胞偏移抑制M1分泌炎性细胞因子的研究

发布时间：2023-04-27 03:37

　　目的研究慢病毒介导弓形虫效应分子ROP16_Ⅰ/Ⅲ(ToxoROP16_Ⅰ/Ⅲ)经旁路途径诱导巨噬细胞RAW264.7(Mφ)向M2型巨噬细胞偏移(M2),抑制经典途径激活巨噬细胞(M1)炎性因子的产生。方法构建表达ROP16_Ⅰ/Ⅲ的重组慢病毒,转染Mφ,通过激活旁路途径向M2型细胞偏移。脂多糖(LPS)诱导Mφ通过经典途径向M1型巨噬细胞细胞偏移。M1和M2细胞进行混合培养。用qRT-PCR检测TNF-α、IL-1β、TGF-β1、IL-10、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)的表达。Western blot检测ROP16_Ⅰ/Ⅲ、iNOS、Arg-1和PD-L2的蛋白表达。结果构建ROP16_Ⅰ/Ⅲ重组慢病毒并成功稳转Mφ,观察可见绿色荧光表达;Arg-1、PD-L2蛋白和TGF-β1、IL-10、Arg-1的mRNA表达升高,表明ROP16_Ⅰ/Ⅲ诱导了M2的偏移。LPS刺激后, qRT-PCR检测巨噬细胞的TNF-α和IL-1βmRNA...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞系
        1.1.2 重组质粒和慢病毒包装
        1.1.3 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 重组慢病毒ROP16Ⅰ/Ⅲ稳转Mφ
        1.2.3 Western blot检测
        1.2.4 qRT-PCR检测mRNA水平的变化
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 重组慢病毒ROP16Ⅰ/Ⅲ转染Mφ
    2.2 LPS刺激Mφ偏移
    2.3 重组慢病毒Lv-ROP16Ⅰ/Ⅲ稳转Mφ偏移
    2.4 Western blot 测M1和M2混合培养iNOS、Arg-1和PD-L2表达
    2.5 qRT-PCR测M1和M2混合培养IL-1β、TNF-α和iNOS表达
3 讨论



本文编号：3802790