抗Na + /Ca 2+ 交换体α-2 840-877 单克隆抗体的制备及其对大鼠心室肌细胞Na + /Ca 2+ 交换

发布时间：2023-06-03 06:36

　　目的： 在制备抗Na+/Ca2+交换体α-2(840-877)单克隆抗体的基础上,观察其对大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换电流以及L-型钙通道、钠通道、内向整流钾通道和瞬时外向钾通道电流的影响。 方法： 1.单克隆抗体的制备和纯化：用化学合成的Na+/Ca2+交换体α-2重复序列肽段(第840-877位氨基酸残基,其序列为algtsvpdtfaskvaatqdqyadasignvtgsnavnvf,简称α-2(840-877))主动免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,经阳性克隆筛选、亚克隆及腹水诱生等步骤制备抗Na+/Ca2+交换体α-2(840-877)单克隆抗体；利用抗原亲和纯化柱对抗体进行纯化,并对纯化后的抗体进行ELISA检测,确定抗体效价。 2.大鼠心室肌细胞的分离：采用胶原酶法急性分离大鼠心室肌细胞。选用健康成年SD大鼠(体重250-300g),击昏放血,迅速开胸取出心脏,修剪后悬挂在Langendorff灌流装置上行主动脉逆行灌流,先用无钙台式液灌流8-10分钟,再用胶原酶液(胶原酶P)循环灌流15-20分钟,待心室变大、变软后剪下心室...

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