布鲁氏菌BP26蛋白的原核表达及鉴定

发布时间：2023-10-30 17:19

　　为了实现布鲁氏菌BP26蛋白在原核宿主细胞进行高效表达,对布鲁氏菌BP26基因进行密码子优化,化学合成了BP26全基因,并将其克隆至pET30a(+)载体上,构建重组质粒pET30a(+)-bp26,转化至基因工程菌BL21(DE3),利用IPTG进行诱导表达。利用His-tag镍柱纯化BP26重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果显示:重组质粒经Nde I与Xhol I双酶切,酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳显示与目的产物条带大小一致;当诱导条件为IPTG浓度1 mmol/L,37℃诱导8 h时,重组蛋白的表达量最高;纯化后的目的蛋白经过Western Blot鉴定,显示在27. 8 kD左右有一条明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。本研究成功实现了在大肠杆菌高效表达BP26蛋白,为后续布病检测新试剂的研制及疫苗的研发奠定了生物学基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株和质粒
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 序列分析、合成
    1.4 p ET30a(+)-BP26重组载体的酶切鉴定
    1.5 重组载体的转化
    1.6 p ET30a(+)-BP26重组蛋白的表达与鉴定
    1.7 p ET30a(+)-BP26重组蛋白的诱导表达条件筛选
    1.8 p ET30a(+)-BP26蛋白的大量表达及纯化
    1.9 重组蛋白p ET30a(+)-BP26的Western Blot鉴定
2 结果与分析
    2.1 酶切结果
    2.2 重组蛋白p ET30a(+)-BP26的诱导表达鉴定
    2.3 重组蛋白p ET30a(+)-BP26诱导条件的优化
    2.4 目的蛋白p ET30a(+)-BP26的纯化以及SDS-PAGE鉴定
    2.5 目的蛋白p ET30a-BP26的Western Blot鉴定
3 讨论



本文编号：3858859