饲养层细胞膜流动性对小鼠诱导性多能干细胞（miPS）的影响

发布时间：2023-11-18 09:17

　　小鼠诱导性多能干细胞（mouse induced pluripotent stem，miPS）是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞。在特定的条件下，诱导多功能干细胞可以增殖并分化为多种类型的细胞，但保持干细胞的高增殖率和未分化状态则高度依赖于其所处的生长微环境，即干细胞壁龛。干细胞与其壁龛之间通过相互作用，实现miPS自我更新能力和分化之间的平衡。如何在体外构建一个这样的微环境是miPS研究的重要环节。 本研究采用不同浓度甲醛（formaldehyde，FA）固定小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryo fibroblast，MEF）作为饲养层细胞，体外培养miPS。探讨化学固定后MEF细胞膜流动性对miPS克隆形成率以及干细胞生物特性的影响，筛选适宜的miPS体外培养条件。研究结果表明，利用2.5%FA温和固定MEF饲养层细胞，可保持饲养层细胞膜表面的流动性，这种稳定的微环境能够滋养miPS在体外增殖，并保持miPS的自我更新能力和未分化的稳定性，培养出高纯度的miPS细胞。 本实验的创新之处在于﹕1.采用温和的FA化学固定的MEF作为饲养层细胞，不但保持饲养层细胞膜流动性...

【文章页数】：87 页

【学位级别】：博士

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提要
中文摘要
Abstract
前言
第1章 文献综述
    1.1 小鼠诱导性多能干细胞（miPS）研究进展
    1.2 诱导多能干细胞的标志物研究进展
    1.3 iPS 细胞的培养
第2章 小鼠胚胎成纤维细胞体外培养及饲养层细胞制备
    概述
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物：
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 实验试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养
        2.2.2 小鼠成纤维胚胎细胞的传代培养
        2.2.3 小鼠胚胎成纤维饲养层细胞的冻存
        2.2.4 饲养层细胞（MEF）的制备
        2.2.5 转染 GFP-EGFR 的 MEF 细胞制备
        2.2.6 单分子成像检测
        2.2.7 评估分子运动情况及膜扩散率的计算
    2.3 实验结果与讨论
        2.3.1 小鼠胚胎成纤维细胞的细胞形态与生长状态
        2.3.2 小鼠胚胎成纤维细胞的化学固定
        2.3.3 MEF 细胞膜表面流动性的分析
    2.4 小结
第3章 饲养层细胞膜流动性对 miPS 生长作用的实验研究
    概述
    3.1 实验试剂
    3.2 细胞来源
    3.3 实验试剂配制
    3.4 实验方法
        3.4.1 小鼠诱导多功能干细胞克隆率形成的分析
        3.4.2 碱性磷酸酶活性检测
        3.4.3 miPS 细胞的 SSEA-1 和 Oct3/4 的表达水平
        3.4.4 miPS 细胞表面标记的荧光显微镜检测
    3.5 实验结果与讨论
        3.5.1 FA 固定 MEF 细胞对 miPS 克隆形成率的影响
        3.5.2 2.5%FA 固定 MEF 细胞表面的生物活性分析
    3.6 小结
第4章 研究总结
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果
致谢



本文编号：3865000