PNS介导BMP-Smad信号通路调控BMSCs成骨分化的机制研究

发布时间：2024-04-24 22:20

　　目的:1.体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs),鉴定后建立稳定的兔BMSCs体外培养体系,并探讨其成骨分化及骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)的蛋白表达受传统中药三七总皂苷(Panax notoginseng saponin,PNS)的影响。2.研究PNS对BMP-Smad经典信号通路的影响,并在此基础上探讨PNS促进BMSCs成骨分化的作用机制。方法:1.BMSCs体外分离培养、鉴定及成骨能力检测的研究:严格无菌操作下,剥离获取新生新西兰大白兔四肢长骨,然后用含胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)和双抗的DMEM冲洗骨髓腔,通过密度梯度离心法、全骨髓贴壁法获取BMSCs后:(1)通过倒置显微镜下观察BMSCs的形态学特点;(2)通过流式细胞术检测BMSCs的表面标志抗原;(3)通过茜素红染色检测细胞内钙结节的形成情况,鉴定兔BMSCs的成骨分化能力。2.PNS对兔BMSCs成骨分化及BMP2蛋白表达的影响:在课题组前期研究的基础上,选用最适浓度(1...

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1体外剥离幼兔长骨Figure1-1Isolationofyoungrabbitlongbonesinvitro

过全骨髓贴壁法及密度梯度离心法正确分离兔BMSCs，初步建立稳MSCs原代培养体系，掌握BMSCs在体外状态下的细胞形态及生长后续实验提供正常充足的细胞。骨髓贴壁法1）处死：挑选健康的年龄一周以内的新西兰大白兔的幼兔一只，其放置于75%的酒精中，要求酒精没过幼兔表面，浸....

图1-2冲洗骨髓腔获取BMSCsFigure1-2RinsethebonemarrowcavitytoobtainBMSCs

洗骨髓腔：将放置于含有双抗的PBS缓冲液内冲洗，将骨头表面残留的少许双抗尽量冲离骨皿内加入适量的10%FBS培养基，剪刀剪去器在培养皿内抽取FBS培养基，冲洗骨髓腔液流入原培养皿内，然后将冲洗液过滤到新的l注射器收集滤液至10ml离心管内。心、重悬、种瓶：室温下....

图1-3密度梯度离心法分离细胞Figure1-3Separationofcellsbydensitygradientcentrifugation

2000r/min，室温下，离心30分钟，离下分为四层，最上层呈红色，为稀释液层，第层，第三层呈透明状，为分离液层，最下层为取第二层的乳白色淋巴细胞层至另外一个干净内加入10ml的细胞洗涤液，1000r/min，室温，小心加入5ml的PBS缓冲液重悬，然后1....

图1-4原代兔BMSCs培养3天（100×）

d信号通路调控BMSCs成骨分化的机制研究兔BMSCs形态学特征观察分别使用全骨髓贴壁法与密度梯度离心法分离培梯度离心法分离培养得到的兔BMSCs中血细胞者在细胞数量上差别并不大，传代后细胞在体异也不大。在倒置相差显微镜下观察，刚分离大小不等的圆形或卵圆形细胞在培....

本文编号：3963585