ES2A与溃疡性结肠炎相关的病理机制研究

发布时间：2023-12-09 16:56

　　肠道是人体内最大的消化器官和免疫器官,因此肠道健康对人类正常生活有举足轻重的影响。炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是指一类发生于肠道的慢性炎症,包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)两种主要类型。UC发病的具体机制目前尚不清楚,目前普遍认为这是一个多因素相互作用而导致的疾病,主要包括微生物、环境、遗传、免疫等因素。本论文主要利用小鼠结肠炎模型,探究ES2A在溃疡性结肠炎中的作用机制。我们从医院收集了 UC患者和正常人各20例的血浆和肠粘膜组织,分别用ELISA和western blot的方法检测ES2A的表达,结果发现UC患者的ES2A的表达水平分别下调了 26.5%和55.3%,提示ES2A可能在溃疡性结肠炎发病中起作用。我们利用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎模型,探究ES2A在UC中的发病机制。我们测定了过表达ES2A组、敲降ES2A组和对照组体重变化、疾病活动指数和结肠缩短程度等症状指标。结果显示,在造模第10...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1.1 溃疡性结肠炎概述
    1.2 溃疡性结肠炎发病机制
        1.2.1 遗传因素
        1.2.2 微生物因素
        1.2.3 肠道上皮屏障
        1.2.4 免疫因素
        1.2.5 溃疡性结肠炎发病机制总结
    1.3 水蛭的吸血策略及弹性蛋白酶的促炎活性
    1.4 本课题的研究内容及意义
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 伦理学声明
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 实验试剂、耗材
        2.1.4 实验试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠结肠炎模型的构建方法
        2.2.2 过表达、敲降ES2A病毒的设计与制备
        2.2.3 石蜡切片及HE染色
        2.2.4 组织蛋白和RNA的提取
        2.2.5 蛋白质免疫印迹
        2.2.6 实时荧光定量PCR
        2.2.7 酶联免疫吸附测定
        2.2.8 BCA法测定蛋白质浓度
        2.2.9 肠系膜淋巴结和肠道固有层单个核细胞的分选
        2.2.10 流式细胞术检测Treg细胞比例
        2.2.11 流式细胞术检测Th17细胞比例
        2.2.12 IL-6刺激细胞实验
        2.2.13 IL-6刺激小鼠实验
        2.2.14 菲牛蛭粗提物的获取与HMEI的分离纯化
        2.2.15 HMEI的质谱鉴定与测序
        2.2.16 酶动力学实验
        2.2.17 中性粒细胞的分离
        2.2.18 中性粒细胞NET形成实验
第3章 ES2A与溃疡性结肠炎相关的病理机制研究
    3.1 溃疡性结肠炎患者的肠粘膜组织和血浆中ES2A水平下调
    3.2 ES2A缓解DSS诱导的小鼠体重下降、疾病活动指数和结肠缩短
    3.3 ES2A减少DSS诱导小鼠的结肠组织病学损伤
    3.4 ES2A缓解DSS诱导的小鼠血清和结肠组织中炎症因子的升高
    3.5 ES2A增加DSS诱导小鼠结肠炎过程中Treg细胞比例
    3.6 ES2A减少DSS诱导小鼠结肠炎过程中Th17细胞比例
    3.7 ES2A抑制TCRα^-/-小鼠自发性溃疡性结肠炎
    3.8 IL-6下调ES2A的表达
第4章 从菲牛蛭中提取的新型弹性蛋白酶抑制剂的活性研究
    4.1 HMEI的分离与纯化
    4.2 HMEI的一级结构
    4.3 HMEI-A抑制中性粒细胞胞外杀菌网络的形成
第5章 讨论
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果



本文编号：3871853