脂肪间充质干细胞（ADMSC）对小肠缺血再灌注损伤的修复作用及机制

发布时间：2023-12-09 19:08

　　目的:1.探讨脂肪间充质干细胞(Adipose Tissue-derived Mesenchymal Stem Cells,ADMSC)在体外分离、培养和纯化的方法,并根据其表型进行鉴定,更好的提供间充质干细胞的来源。2.建立大鼠小肠缺血再灌注损伤动物模型并对其进行评估。3.探讨脂肪间充质干细胞对小肠缺血再灌注损伤的修复作用及机制。方法:1.取雄性SD大鼠腹股沟区的脂肪组织;进行分离、培养、纯化ADMSC(贴壁培养法),脂肪间充质干细胞生长到70%-80%时进而传代;第一次传代获得的ADMSC为第一代(P1),使用P3-P5进行后续试验。2.建立雄性SD大鼠小肠缺血再灌注损伤动物模型:SD大鼠禁食12小时后,2%戊巴比妥(2mg/kg)腹腔注射麻醉SD大鼠(200-250克)后,腹部皮肤消毒并打开腹腔,分离出肠系膜上动脉,使用无损伤小血管夹夹闭之60分钟后移除血管夹,缝合腹壁,建立SD大鼠小肠缺血再灌注损伤动物模型并对其进行评估。3.采用ADMSC腹腔注射处理,观察对小肠缺血再灌注损伤的修复作用及调控的机制;结果:1.将脂肪间充质干细胞成功分离、培养、纯化后,24小时后利用倒置相差显微...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语／符号说明
前言
第一部分 大鼠ADMSC的分离培养、鉴定及小肠缺血再灌注损伤模型
    材料与方法
        1 主要试剂和仪器
            1.1 实验材料
            1.2 主要试剂
            1.3 常用溶液配制
            1.4 需要仪器
        2 实验方法
            2.1 大鼠脂肪间充质干细胞的培养
            2.2 ADMSC的保存和复苏
            2.3 ADMSC的标记及鉴定
            2.4 小肠缺血再灌注损伤模型建立
            2.5 小肠缺血再灌损伤的评估
        3 统计分析
    实验结果
        1 ADMSC的形态学观察
        2 ADMSC的流式细胞的鉴定
        3 小肠缺血再灌损伤的模型的变化和确认
        4 小肠再灌注损伤损伤模型的免疫组化的确认
    讨论
第二部分 ADMSC对肠缺血再灌注损伤的修复作用和机制
    材料与方法
        1 主要试剂和仪器
            1.1 实验材料
            1.2 主要试剂
            1.3 常用溶液配制
            1.4 需要仪器
        2 实验方法
            2.1 大鼠脂肪间充质干细胞的培养
            2.2 ADMSC的保存和复苏
            2.3 ADMSC的标记及鉴定
            2.4 小肠缺血再灌注损伤模型建立及分组
            2.5 小肠缺血再灌损伤的评估
            2.6 组织病理学(HE)分析
            2.7 组织免疫荧光分析
            2.8 ADMSC腹腔内移植
            2.9 免疫组织化学染色法(immunohistochemistry,IHC)
            2.10 蛋白质免疫印迹(Western blot)
        3 统计分析
    结果
        1 移植ADMSC在小肠缺血再灌注损伤的病变区表达
        2 ADMSC减轻肠缺血再灌注损伤
        3 病理评估显示ADMSC促进愈合
        4 ADMSC减少肠缺血再灌注损伤中IL-6 炎症因子表达
        5 ADMSC促进肠缺血再灌注损伤中血管再生及与COX2-PGE2通路相关
        6 ADMSC促进小肠缺血再灌注损伤COX2 表达
    讨论
全文结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3871980