内源性硫化氢合成酶参与新生期母爱剥夺诱导成年大鼠内脏过敏的外周机制研究
发布时间：2024-03-12 01:27
目的 1.初步阐明新生期母爱剥夺(Neonatal Maternal Deprivation, NMD)诱导的成年大鼠内脏痛过敏中脊髓背根节神经元上电压门控性钠通道表达和功能的变化特征。 2.探讨内源性硫化氢合酶胱硫醚-β-合成酶(CBS)在慢性内脏痛中的作用及其对电压门控性钠通道表达和功能调控的影响。 方法 1.新生鼠从出生后第2天开始到第15天，处理组和母鼠分离，每天分开3个小时，对照组不做处理。运用这种方法诱导大鼠的内脏痛过敏模型。运用腹壁撤回评分(AWR score)方法评测NMD大鼠的痛行为反应。腹腔注射CBS阻断剂羧甲基羟胺半盐酸(AOAA)，同样运用以上腹壁撤回评分方法评测大鼠的痛行为反应，从而检测H2S在慢性痛模型中的作用。 2.结肠管壁注射荧光素(DiI)来标记肠特异性背根神经节(DRG)神经元，运用全细胞膜片钳方法研究大鼠肠相关神经元兴奋性及电压依赖性钠通道电流的变化特性。 3.运用Western Blotting，免疫组织化学，Quantitative Real-time PCR的实验方法检测大鼠肠相关DRG神经元中NaV1.8，NaV1.9...
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 材料与方法
2.1 实验动物
2.2 新生期母爱剥夺(NMD)模型建立
2.2.1 实验仪器
2.2.2 造模方法
2.3 腹壁撤回反射(Abdominal Withdrawal Reflex，AWR) 评分检测痛阈
2.3.1 实验仪器
2.3.2 实验方法
2.3.3 给药方法
2.3.4 实验用药
2.4 Western Blotting 检测蛋白表达
2.4.1 实验试剂
2.4.2 实验仪器
2.4.3 实验方法
2.5 急性分离 DRG 神经元和全细胞膜片钳实验
2.5.1 实验试剂
2.5.2 实验仪器
2.5.3 荧光染料 DiI 标记肠相关 DRG 神经元
2.5.4 急性分离 DRG 神经元
2.5.5 拉制玻璃微电极
2.5.6 全细胞膜片钳记录
2.5.7 神经元兴奋性记录
2.6 实时 PCR 方法检测 NaV1.8 表达变化
2.6.1 T13–L2 DRG 总 RNA 的提取
2.6.2 cDNA 的合成
2.6.3 实时 PCR 检测 NaV1.8 基因 mRNA 表达
2.7 CBS 和 NaV1.8 的免疫荧光
第三章 实验结果
3.1 钠通道的可塑性在 NMD 诱发的内脏痛过敏中的作用
3.1.1 NMD 明显增加大鼠对结肠扩张的敏感性
3.1.2 全细胞膜片钳记录发现 NMD 使肠相关的背根神经节神经元兴奋性增加
3.1.3 NMD 使肠相关的背根神经节神经元 TTX 不敏感钠电流密度显著增加
3.1.4 NMD 使肠相关 DRG 神经元 TTX-R 钠通道激活曲线左移
3.1.5 NMD 显著缩短 TTX-R 钠通道的激活时间
3.1.6 NMD 可以显著增加肠特异 DRG 神经元中 NaV1.8 的表达
3.2 CBS-H2S 信号系统在钠通道可塑性中的调节作用
3.2.1 CBS 受体拮抗剂 AOAA 可以显著翻转 NMD 诱导的内脏痛过敏
3.2.2 AOAA 可以显著降低 NMD 大鼠肠 DRG 神经元中 NaV1.8 的表达
3.2.3 AOAA 可以显著降低 NMD 大鼠肠相关 DRG 神经元的 TTX-R 钠通道的电流密度
3.2.4 CBS 的拮抗剂 AOAA 使 NMD 大鼠 TTX-R 钠通道的激活曲线右移
3.2.5 AOAA 可以显著降低 NMD 大鼠肠相关 DRG 神经元的兴奋性
3.2.6 H2S 的供体 NaHS 可以显著增加正常大鼠肠相关 DRG 神经元的兴奋性
3.2.7 NaHS 可以显著增加正常大鼠肠相关 DRG 神经元的 TTX-R 钠通道的电流密度
3.2.8 NaHS 可以使得正常大鼠肠相关 DRG 神经元的 TTX-R 钠通道的激活曲线左移
3.2.9 PKA 抑制剂 H-89 阻断 NaHS 引起正常大鼠的钠电流密度的增加
第四章 讨论
参考文献
综述
Reference
攻读硕士学位期间公开发表的论文
致谢
本文编号：3926325
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 材料与方法
2.1 实验动物
2.2 新生期母爱剥夺(NMD)模型建立
2.2.1 实验仪器
2.2.2 造模方法
2.3 腹壁撤回反射(Abdominal Withdrawal Reflex，AWR) 评分检测痛阈
2.3.1 实验仪器
2.3.2 实验方法
2.3.3 给药方法
2.3.4 实验用药
2.4 Western Blotting 检测蛋白表达
2.4.1 实验试剂
2.4.2 实验仪器
2.4.3 实验方法
2.5 急性分离 DRG 神经元和全细胞膜片钳实验
2.5.1 实验试剂
2.5.2 实验仪器
2.5.3 荧光染料 DiI 标记肠相关 DRG 神经元
2.5.4 急性分离 DRG 神经元
2.5.5 拉制玻璃微电极
2.5.6 全细胞膜片钳记录
2.5.7 神经元兴奋性记录
2.6 实时 PCR 方法检测 NaV1.8 表达变化
2.6.1 T13–L2 DRG 总 RNA 的提取
2.6.2 cDNA 的合成
2.6.3 实时 PCR 检测 NaV1.8 基因 mRNA 表达
2.7 CBS 和 NaV1.8 的免疫荧光
第三章 实验结果
3.1 钠通道的可塑性在 NMD 诱发的内脏痛过敏中的作用
3.1.1 NMD 明显增加大鼠对结肠扩张的敏感性
3.1.2 全细胞膜片钳记录发现 NMD 使肠相关的背根神经节神经元兴奋性增加
3.1.3 NMD 使肠相关的背根神经节神经元 TTX 不敏感钠电流密度显著增加
3.1.4 NMD 使肠相关 DRG 神经元 TTX-R 钠通道激活曲线左移
3.1.5 NMD 显著缩短 TTX-R 钠通道的激活时间
3.1.6 NMD 可以显著增加肠特异 DRG 神经元中 NaV1.8 的表达
3.2 CBS-H2S 信号系统在钠通道可塑性中的调节作用
3.2.1 CBS 受体拮抗剂 AOAA 可以显著翻转 NMD 诱导的内脏痛过敏
3.2.2 AOAA 可以显著降低 NMD 大鼠肠 DRG 神经元中 NaV1.8 的表达
3.2.3 AOAA 可以显著降低 NMD 大鼠肠相关 DRG 神经元的 TTX-R 钠通道的电流密度
3.2.4 CBS 的拮抗剂 AOAA 使 NMD 大鼠 TTX-R 钠通道的激活曲线右移
3.2.5 AOAA 可以显著降低 NMD 大鼠肠相关 DRG 神经元的兴奋性
3.2.6 H2S 的供体 NaHS 可以显著增加正常大鼠肠相关 DRG 神经元的兴奋性
3.2.7 NaHS 可以显著增加正常大鼠肠相关 DRG 神经元的 TTX-R 钠通道的电流密度
3.2.8 NaHS 可以使得正常大鼠肠相关 DRG 神经元的 TTX-R 钠通道的激活曲线左移
3.2.9 PKA 抑制剂 H-89 阻断 NaHS 引起正常大鼠的钠电流密度的增加
第四章 讨论
参考文献
综述
Reference
攻读硕士学位期间公开发表的论文
致谢
本文编号：3926325
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/3926325.html