13诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大研究

发布时间：2016-10-04 18:14

  本文关键词：内质网应激—自噬途径介导apelin-13诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大研究，由笔耕文化传播整理发布。

《南华大学》 2014年

内质网应激—自噬途径介导apelin-13诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大研究

谢凤  

【摘要】：目的：Apelin为G蛋白偶联受体APJ的内源性配体，具有促进血管平滑肌细胞增殖，，促进单核细胞向内皮细胞粘附等作用。本实验室前期研究结果发现，apelin-13可以诱导心肌细胞肥大，且PI3K-Akt-ERk1/2-p70S6K信号途径和PI3K-自噬途径均介导了apelin-13诱导的心肌细胞肥大过程。本课题拟研究apelin-13对NOX4的表达及内质网应激的影响，并在前期研究的基础上进一步探讨apelin-13诱导心肌细胞肥大的内质网应激-自噬机制，揭示apelin-13诱导心肌肥厚的新的作用机制，为开发APJ为心血管药物作用靶点提供新的理论依据。 方法: 1. Western Blot：检测大鼠H9c2心肌细胞APJ, Bip, CHOP, LC3-II/I, beclin-1, p62,NOX4, β-Tubulin的表达； 2. SiRNA干扰: APJ shRNA干扰APJ的表达；Bip siRNA干扰Bip的表达；CHOPsiRNA干扰CHOP的表达； 3.免疫荧光标记LC3及氯喹阻断自噬体的降解，观察自噬体的形成;或者使用GFP-LC3示踪观察自噬体的形成； 4. ER tracker-red荧光标记内质网，观察内质网形态； 5. ScepterTM手持式细胞计数器:测量大鼠H9c2心肌细胞直径和体积； 6. BCA定量法：测定大鼠H9c2心肌细胞蛋白含量； 7. CCK-8试剂盒检测apelin-13对细胞增殖的影响； 8. Hoechst33258染色检测apelin-13对心肌细胞凋亡的影响； 结果： 1. Apelin-13浓度依赖（0-2μM）和时间依赖性（0-24h）促进心肌细胞内NOX4的表达 2. Apelin-13浓度依赖（0-2μM）和时间依赖性（0-24h）促进心肌细胞内质网应激标志蛋白Bip和CHOP的表达； 3. APJ shRNA抑制apelin-13（1μM）诱导的心肌细胞内质网应激标志蛋白Bip和CHOP的增加； 4. Apelin-13诱导原代心肌细胞自噬体的形成，APJ shRNA抑制apelin-13（1μM）诱导的心肌细胞自噬标志蛋白beclin1、LC3-II/I的表达增加； 5. NOX4抑制剂DPI阻断apelin-13（1μM）诱导的内质网应激标志蛋白Bip和CHOP的增加； 6. NOX4抑制剂DPI阻断apelin-13（1μM）诱导的心肌细胞自噬标志蛋白beclin1、LC3-II/I的表达增加和自噬降解蛋白p62的表达减少； 7.内质网应激抑制剂Salubrinal阻断apelin-13诱导的beclin1和LC3-II/I的表达增加及p62的表达降低；内质网应激诱导剂Tunicamycin对apelin-13诱导的beclin1和LC3-II/I及p62表达均无影响;Bip siRNA和CHOP siRNA阻断apelin-13诱导的beclin1和LC3-II/I的表达增加及p62的表达降低； 8. Apelin-13促进H9c2心肌细胞中GFP-LC3在内质网上表达，提示可能发生了内质网自噬； 9. APJ shRNA抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；内质网应激抑制剂Salubrinal阻断apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；内质网诱导剂Tunicamycin增强apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；自噬抑制剂3MA也可以阻断apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加作用；Bip siRNA和CHOP siRNA同样具有抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞直径、体积增大和细胞内蛋白含量增加的作用； 10. Apelin-13浓度依赖性（0-2μM）促进心肌细胞增殖； 11. Apelin-13浓度依赖（0-2μM）和时间依赖性（0-24h）增加心肌细胞凋亡； 12.内质网应激抑制剂Salubrinal和自噬抑制剂3MA均可阻断apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞凋亡作用；Bip siRNA和CHOP siRNA抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞凋亡作用。 结论：NOX4-内质网应激-自噬途径介导apelin-13促心肌细胞肥大和凋亡调节。

【关键词】：
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R966
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 XIE Feng;LI LanFang;CHEN LinXi;;Autophagy, a new target for disease treatment[J];Science China(Life Sciences);2013年09期

2 谢凤;柳威;陈临溪;;自噬参与心脏疾病调控的研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2012年03期

3 谢凤;李兰芳;陈临溪;;APJ受体作为心肌细胞压力感受器诱导心肌肥厚的形成[J];生物化学与生物物理进展;2013年01期

4 余洋;黄德嘉;;Apelin对心肌细胞肥大的影响[J];心脏杂志;2006年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王化恺;严佶祺;李宏为;;Apelin/APJ信号通路在门静脉高压症中的研究进展[J];肝胆外科杂志;2013年04期

2 曲鹏;宋险峰;胡瀚;李梦阳;;Apelin-13对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质Akt和磷酸化Akt表达的调节[J];解剖学研究;2013年04期

3 张松;邹晓平;;HSP27与消化系统肿瘤耐药相关性的研究进展[J];国际消化病杂志;2013年05期

4 潘劲萍;;妊娠糖尿病患者空腹血清Apelin-36水平变化及相关性研究[J];安徽医学;2014年06期

5 刘丹;刘增长;;外源性apelin-13对大鼠动脉粥样硬化形成的影响[J];第三军医大学学报;2014年17期

6 韩冰;杨琴;崔清华;;选择性自噬的研究进展[J];安徽农业科学;2014年25期

7 Jun-Hui Du;Xia Li;Rong Li;Lin Xu;Ran-Ran Ma;Song-Fang Liu;Zhong Zhang;Hong-Zhi Sun;;Elevation of serum apelin-13 associated with proliferative diabetic retinopathy in type 2 diabetic patients[J];International Journal of Ophthalmology;2014年06期

8 李莉;李瑞杰;宋丽芬;耿敖;高蕾;;高血压患者血浆Apelin与左心室肥厚及颈动脉粥样硬化的关系[J];中国动脉硬化杂志;2008年07期

9 谢秀峰;崔晓迎;陈凤英;唐朝枢;;Apelin-APJ系统与心血管疾病[J];中国动脉硬化杂志;2008年11期

10 温继梨;承喜凤;;Apelin在心力衰竭方面的研究进展[J];内蒙古医学杂志;2008年05期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 吴德华;Apelin对肺微血管内皮细胞保护作用的实验研究[D];复旦大学;2008年

2 吕心瑞;Am80调节apelin基因表达的分子机制研究[D];河北医科大学;2013年

3 王振华;新生小鼠心肌再生机制的研究[D];北京协和医学院;2013年

4 刘楠;Apelin对缺血—再灌注损伤导致的心脏功能障碍的保护作用及机制研究[D];第四军医大学;2013年

5 张学农;化合物RY10-4部分作用机制及抗肿瘤活性的研究[D];华中科技大学;2013年

6 王亮;活细胞中内吞囊泡和自吞噬囊泡的荧光成像研究[D];华中科技大学;2013年

7 范晋奇;心房过表达血管紧张素转化酶2改善犬心房快速起搏所致的结构重构的实验研究[D];重庆医科大学;2013年

8 王惟;氯喹对自体吞噬的诱导作用及泛素样结合系统中Atg12-140-Atg5蛋白复合物的分解研究[D];吉林大学;2013年

9 郭红宇;女性阴道炎患者阴道内环境中氧化应激状况及其致细胞凋亡的机制研究[D];兰州大学;2012年

10 冯雪丹;自噬在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠神经元退行性变中的作用及机制探讨[D];河北医科大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 周湘鸿;NT-proBNP和Apelin-12在冠心病患者血浆中的变化及意义[D];郑州大学;2010年

2 赵富利;血清apelin水平与2型糖尿病并颈动脉粥样硬化的关系[D];郑州大学;2010年

3 杨艳杰;侧脑室注射apelin-13抑制小鼠远端结肠运动[D];兰州大学;2011年

4 张胜叶;外源性Apelin-13对心力衰竭大鼠心功能和血浆BNP、NO的影响[D];兰州大学;2011年

5 夏茏;高血压伴心力衰竭患者血浆Apelin水平的研究[D];山东大学;2011年

6 封芬;Apelin/APJ参与大鼠心肌肥厚形成的caveolin-1-Akt信号通路研究[D];南华大学;2007年

7 易秋艳;心房颤动患者血浆Apelin水平变化及其与心脏自主神经功能关系的研究[D];广西医科大学;2008年

8 刘燕;兔急性肺动脉栓塞时Apelin-APJ系统的变化及意义[D];河北医科大学;2010年

9 李新;PI3K通路介导apelin促H9c2大鼠心肌细胞肥大[D];南华大学;2010年

10 栗舒娅;Apelin促进血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用机制[D];河北医科大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李莉;李瑞杰;宋丽芬;耿敖;高蕾;;高血压患者血浆Apelin与左心室肥厚及颈动脉粥样硬化的关系[J];中国动脉硬化杂志;2008年07期

2 朱传升;侯明;王金慎;王焱;徐文伟;董琳;;三氧化二砷诱导肝癌细胞系HepG-2自噬及其机制研究[J];中国现代普通外科进展;2007年04期

3 林芳,顾振纶,秦正红;自噬及其在细胞代谢和疾病中的作用[J];生物化学与生物物理进展;2005年04期

4 刘厂辉;李新;陈锋;潘伟男;封芬;秦旭平;李兰芳;苏桃;陈临溪;;ERK1/2参与自发性高血压大鼠离体血管环对apelin-13舒张反应性降低作用[J];生物化学与生物物理进展;2009年12期

5 潘伟男;李峰;毛小环;秦旭平;邓水秀;封芬;陈锋;李兰芳;廖端芳;陈临溪;;14-3-3参与apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖ERK1/2信号途径研究(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2011年12期

6 谢凤;柳威;陈临溪;;自噬参与心脏疾病调控的研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2012年03期

7 赵美;臧伟进;;巨自噬在心脏疾病调节中的双向作用[J];生理科学进展;2011年02期

8 李文静;徐文婷;谭颖;白晓春;;活性氧类与mTOR信号通路[J];生命的化学;2010年06期

9 张圣雪;邱龄;肖传实;方雅琴;李艳芳;;阿托伐他汀对血管内皮细胞自噬作用的影响[J];山西医科大学学报;2009年05期

10 马泰;孙国平;李家斌;;细胞自噬的研究方法[J];生物化学与生物物理进展;2012年03期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;一氧化氮在防止内皮素-1诱导心肌细胞肥大中的作用[J];岭南心血管病杂志;2000年04期

2 谢协驹,符史干,吉丽敏;肾上腺素致心肌细胞肥大的机制[J];海南医学;2001年07期

3 黄俊,覃国辉,马业新,刘启功;转化生长因子β_1与大鼠心肌细胞肥大关系的实验研究[J];华中科技大学学报(医学版);2003年05期

4 陈吉,吴强;活性氧在心肌细胞肥大信号转导中的作用[J];中国临床康复;2004年15期

5 李莉,程龙献,廖玉华;牵张致心肌细胞肥大的分子机制[J];临床心血管病杂志;2004年07期

6 孙琦,王晋明,王颖,王晶,胡萍,胡文兰,牛萍;血管紧张素ⅡⅠ型受体反义寡核苷酸体外逆转心肌细胞肥大[J];武汉大学学报(医学版);2005年02期

7 梁春光;王洪新;黄雷;刘杰;;尿促皮素诱导乳大鼠心肌细胞肥大的作用及信号传导机制[J];中国药理学与毒理学杂志;2009年06期

8 李甜甜;王东明;;血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大作用研究进展[J];汕头大学医学院学报;2011年03期

9 徐浩;孙丽君;张建保;;钙依赖途径在高糖致心肌细胞肥大中的作用[J];西安交通大学学报(医学版);2012年02期

10 张振辉;黎佼;熊旭明;陈伟燕;刘世明;;微小RNA-199a-5p调控大鼠心肌细胞肥大的研究[J];中国病理生理杂志;2014年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李爱民;李巍;耿建萌;;氯沙坦对UⅡ诱导的乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用[A];中华医学会第十五次全国心血管病学大会论文汇编[C];2013年

2 李子健;刘宁;龚开政;蔡元彬;张永新;刘志强;韩启德;张幼怡;;肾上腺素受体介导新生大鼠心肌细胞肥大相关蛋白质表达谱及其调控网络模式[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年

3 李玲;袁文俊;;尾加压素Ⅱ促新生大鼠心肌细胞肥大作用及其机制[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第二部分）[C];2002年

4 周红敏;晋玉章;谢文利;刘艳霞;;黄芪苷Ⅳ对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

5 潘秀颉;李玲;吴国宏;袁文俊;;尾加压素Ⅱ促培养的新生大鼠心肌细胞肥大作用[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

6 韩冬;曲绍春;于晓风;睢大筼;;人参皂苷Rb_3对血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大的影响[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年

7 田泽君;崔炜;李拥军;郝玉明;都军;刘凡;祖秀光;张辉;刘素云;谢瑞琴;杨晓红;武宇洲;;Gp130下游信号传导通路在心肌营养素-1致心肌细胞肥大中的作用[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

8 韩冬;曲绍春;于晓风;睢大筼;;人参皂苷Rb3对血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大的影响及机制[A];中国药理学会补益药药理专业委员会成立大会暨人参及补益药学术研讨会会议论文集[C];2011年

9 耿召华;牛丽丽;刘玉峰;胡宝奎;王江;;Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大负性调控作用的基础研究[A];中华医学会第十五次全国心血管病学大会论文汇编[C];2013年

10 陈永清;赵连友;郑强荪;李言川;尚福军;李爱国;王斌;于心亚;陈军红;;辛伐他汀对大鼠心肌细胞肥大及蛋白激酶B表达的影响[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 张弋;神经肽Y诱导心肌细胞肥大的钙调控机制研究[D];广州医学院;2008年

2 林瑾仪;促红细胞生成素对心肌细胞肥大影响的实验研究[D];复旦大学;2009年

3 文渊;促红细胞生成素拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大的研究[D];华中科技大学;2009年

4 侯宁;瘦素诱导心肌细胞肥大的机制研究[D];广州医学院;2010年

5 王晓礽;肌纤生成调节因子-1致心肌细胞肥大的分子机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年

6 许旭东;miR-22在大鼠心肌细胞肥大中的作用[D];第二军医大学;2011年

7 杨晋静;溶血磷脂酸对心肌细胞肥大和抗缺氧/复氧损伤的信号调控机制[D];北京协和医学院;2013年

8 石永英;TGF-β_1诱导的大鼠心肌细胞肥大及葛根素干预的实验研究[D];广州医学院;2008年

9 于林君;磷酸酶与张力蛋白同源物PTEN过度表达负性调控血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大及其机制[D];第三军医大学;2005年

10 郑斌;hhlim基因的表达调节及其与心肌细胞肥大发生之间的关系[D];河北医科大学;2003年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 朱春瑜;钙神经素信号途径在前列腺素F2α诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用[D];华中科技大学;2008年

2 陈军红;尾加压素Ⅱ调控心肌细胞肥大的作用和阿伐他汀干预效果的研究[D];第四军医大学;2004年

3 王瑾;内源性缓缴肽对血管紧张素-I诱导乳鼠心肌细胞肥大的影响[D];山西医科大学;2005年

4 王丽;乌苏里藜芦生物碱抑制乳鼠心肌细胞肥大作用的实验研究[D];大连医科大学;2007年

5 杨晓宁;17β雌二醇对培养的新生大鼠心肌细胞肥大的影响[D];武汉大学;2005年

6 代文静;活性氧介导PGF_（2α）诱导的心肌细胞肥大[D];华中科技大学;2008年

7 左辉华;尾加压素Ⅱ对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响[D];暨南大学;2004年

8 余洋;Apelin对心肌细胞肥大的影响[D];四川大学;2004年

9 姜志华;EPO对高糖环境下乳鼠心肌细胞肥大的影响[D];昆明医科大学;2014年

10 吉丽敏;一氧化氮抑制AngⅡ诱导新生大鼠心肌细胞肥大反应的机制[D];山西医科大学;2004年

  本文关键词：内质网应激—自噬途径介导apelin-13诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：131155