TFV及黄酮类化合物手性拆分方法研究

发布时间：2016-10-17 22:12

  本文关键词：新药ODE-TFV及黄酮类化合物手性拆分方法研究，由笔耕文化传播整理发布。

《北京协和医学院》 2013年

新药ODE-TFV及黄酮类化合物手性拆分方法研究

孙亚男  

【摘要】：手性是三维物体的基本属性。当不存在外部影响时,对映体具有完全相同的化学和物理性质,但当其进入体内后,对映体与体内手性靶分子之间的匹配和分子识别不同,显示出不同的药理作用和毒副作用。所以单一对映体的药物研发成为了药物发展中的一个必然趋势。近些年,对于手性化合物的拆分方法的研究已经有了突破性的进展。采用高效液相色谱方法进行对映体光学拆分,已成为测定光学纯度和获得光学纯药物的确实可行的方法。 本文采用手性流动相法(CMPA)和手性固定相法(CSP)成功的拆分了新药ODE-TFV及14种黄酮类化合物。本论文主要分为以下两个部分： 第一部分,采用高效液相色谱手性固定相法(HPLC-CSP)拆分新药ODE-TFV。考察了不同的色谱柱在相同的分离条件下的拆分情况,不同极性调节剂、流动相的pH、柱温和流速对保留时间、柱效和分离度的影响。确定的色谱条件为：色谱柱Chiralcel OZ-H手性柱；流动相正己烷-乙醇-二乙胺-三氟乙酸(82：16：0.1：0.025,V/V/V/V);流速1mL/min;检测波长260nm；柱温35℃；进样体积10μL,对映体的分离度Rs=2.1。方法学验证结果表明,R型ODE-TFV在0.542-108.4μg/mL范围内线性良好,精密度分别为1.8%(0.542μg/mL),0.8%(10.84μg/mL),检出限和定量限分别为0.2μg/mL、0.4μg/mL。方法可有效的测定ODE-TFV的手性杂质,保证ODE-TFV的有效性。 第二部分,采用高效液相色谱法中的两种拆分方法(即手性流动相法CMPA和手性固定相法CSP)对14种黄酮类化合物进行手性拆分。 首先研究高效液相色谱手性流动相法(HPLC-CMPA)拆分14种黄酮类化合物对映体。考察了不同的手性流动相添加剂、有机相的种类和比例、缓冲盐的种类和浓度以及pH对于可拆分黄酮类化合物的影响。确定的分离条件为：色谱柱Kromasil100-5C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈-10mmol/L SBE-β-CD水溶液(含20mmol/L KH2PO4,磷酸调节pH值到4)20：80,V/V,流速1mL/min,柱温25℃实验结果,在磺丁基醚-β-环糊精(SBE-p-CD)手性流动相上可以拆分其中的5种化合物,分别为：二氢黄豆苷原、雌马酚、柚皮素、山姜素和橙皮素。当流动相添加剂改为羟丙基-β-环糊精(HP-p-CD)后,采用的色谱条件为：Kromasil100-5C,8(250mm－4.6mm,5μm),流动相乙腈-25mmol/L HP-β-CD水溶液(含20mmol/L KH2PO4)20:80, V/V,流速1mL/min,柱温25℃。此流动相条件下,可以拆分其中的4种化合物,分别为：二氢黄豆苷原、雌马酚、高圣草和素山姜素。二氢黄豆苷原、雌马酚和山姜素在上述两种方法中,均可以达到基线分离。此方法可应用于此三种化合物的对映体拆分研究。 其次研究高效液相色谱手性固定性法(HPLC-CSP)拆分14种手性黄酮类化合物。在两种手性柱Chiralpak AD-H和Chiralcel OZ-H上建立了最佳的手性分离条件。分别考察了流动相的比例、三氟乙酸的添加及醇的种类对于黄酮类化合物手性识别的影响。最终确定的手性柱Chiralpak AD-H色谱条件为：流动相Ⅰ正己烷：异丙醇：三氟乙酸(TFA)(75：25：0.1,V/V/V/V);流动相Ⅱ正己烷：乙醇：三氟乙酸(75：25:0.1, V/V/V/V);流速0.5mL·min-1,柱温35℃,进样量10μLL,检测波长290nm。14种黄酮类化合物中只有鱼藤酮(Rotenone)没有被拆分,二氢黄豆苷原的分离度为1.0,其它化合物均能达到基线分离(在流动相Ⅰ或是流动相Ⅱ条件下)。改为手性柱Chiralcel OZ-H后,色谱条件为：流动相Ⅰ正己烷：异丙醇：三氟乙酸(TFA)(75:25:0.1, V/V/V/V);流动相Ⅱ正己烷：乙醇：三氟乙酸(75:25:0.1, V/V/V/V);流速0.5mL·min-1,柱温35℃,进样量10gL,检测波长290nm。实验结果,鱼藤酮(Rotenone)仍不能被拆分,除了二氢黄豆苷原、雌马酚和松鼠素不能达到基线拆分外,其它化合物均能达到(在流动相Ⅰ或是流动相Ⅱ条件下)。结果表明,在直链淀粉手性柱Chiralpak AD-H上,异丙醇和乙醇对于13种化合物拆分结果的影响明显,不同的化合物选用不同的醇类添加剂；而对于纤维素手性柱Chiralcel OZ-H,拆分影响不明显,异丙醇体系的拆分结果要略优于乙醇。整体上,直链淀粉手性柱和纤维素手性柱在拆分手性化合物上具有一定的互补性,直链淀粉手性柱ChiralpakAD-H较优。两款色谱柱拆分结果不一致,推断两款手性柱的拆分机理不同。 在手性药物的研究中,手性化合物的拆分是关键环节。由于目前对于手性拆分的机理还不是十分清楚,所以需要不断的实验尝试和研究。本研究在这方面进行了有益的探索,综合比较了各种拆分方法,为手性药物分析理论研究提供了数据基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R917
【目录】：

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