总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用研究进展

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２０９４

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?综述与讲座?

总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用研究进展
田永利 许志宇 葛林刘娜

【关键词】 总黄酮；药理作用；含量测定 【中图分类号】 Ｒ ６５６．２ 【文献标识码】

Ａ

【文章编号】

１００２—７３８６（２０１０）１５—２０９４—０３

总黄酮类化合物是广泛地存在于植物中的一类化合物，目 前已有近万种总黄酮被鉴定，植物经光合作用产生的一大类低
分子量天然物质，在蔬菜、作物、水果等植物中均有分布，此类 化合物具有具有保护心脑血管、利胆保肝、清除自由基、抗氧 化、抗癌、抗菌、抗过敏、抗炎症、抗病毒等多种生物活性及药理

数分光光度法。 １．２色谱测定方法陈丛瑾等列综述了黄酮类化合物含量的 色谱测定方法，包括薄层扫描法、高效液相色谱、超临界流体色

谱等，旨在为黄酮类化合物的研究、开发、应用提供参考。
１．２．１

薄层扫描法（ＴＬＣＳ）：亦称薄层光密度法（ＴＬＣ－Ｄｅｎｓｉ－

作用。不少总黄酮化合物同时还存在多种功效。
１

ｔｏｍｅｔｒｙ），是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合 起来的一种新型仪器分析方法。样品经薄层分离后直接测定 或经适当处理后使之显色或产生荧光，在特定波长下用光度计

总黄酮含量测定

中药成分复杂，总黄酮化合物生物活性及药理作用显著，
种类繁多，为了明确哪类中药总黄酮含量较高，总黄酮含量测 定成为重要方法。选择适当检测方法测量总黄酮含量，有利于 提高药物分析准确性。
１．１

测定其吸光度或荧光强度的方法。具有快速、简便、专属性好。
同时可测定多个样品的特点，广泛的应用在中药及其制剂的 研究中，进行中药的成分研究和含量测定。
１．２．２

紫外可见分光光度法严赞开…综述了紫外分光光度法

高效液相色谱法（ＨＰｌ．Ｃ）：是在液相色谱的基础上引入

测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双

气相色谱的理论和技术，并加以改进而发展起来的一种重要的 分离分析方法。具有分离效能高，分析速度快，灵敏度高等特 点。电化学检测器提高了高效液相的检测的灵敏度和准确度， 而且可以连续检测中药中的多种总黄酮成分。 １．２．３超临界流体色谱法（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ
ｆｌｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，

波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合
物含量的原理及分析特性。
１．１．１

紫外可见分光光度法：是以分子吸收光谱为基础的紫

外一可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带Ｉ（３００—
４００

ｎｍ）和峰带ＩＩ（２２０—２８０ ｔｉｍ）光谱区的吸光度来进行分析

ＳＦＣ法）：近年来出现的一种新方法，在分析领域得到应用，该 法在国际上发展很快，但在我国还处于探索阶段。 １．３毛细管电泳法是以电场驱动离子或荷电粒子，在毛细

测定的方法。具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较 好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。

１．１．２比色法：是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它
主要以Ａ１（Ｎ０３）３为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮 形成红色螯合物为特征。常用于总黄酮类化合物含量测定的 金属盐试剂有Ａ１（Ｎ０３）３、ＡＩＣｌ３等。

管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速的电泳分离新技
术。常用的方法主要有毛细管区带电泳（ＣＺＥ）、胶束电动力学 毛细管色谱（ＭＥＫＣ）、毛细管凝胶电（ＣＧＥ）、毛细管等速电泳 （ＣＩＴＰ）等。操作模式中特别是ＣＺＥ和ＭＥＫＣ都能很好的用于 中药成分含量分析。具有柱效高、分离速率快、样品用量少，适 用于“脏样品”分析等特点。

１．１．３差示分光光度法简称△Ａ法：使用稍高于样品或稍低
于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。而

此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系。借差
示工作曲线而求出样品的含量。

１．４荧光分光光度法利用黄酮类化合物与某些金属离子的
络合物在紫外线照射下可产生荧光，在一定条件下，荧光强度 与该物质的浓度成正比的性质可建立黄酮类化合物的荧光光 度法。总黄酮化合物的荧光光度测定法尚不多见，桑色素用于 铍的荧光光度测定有很高灵敏度，常被用作黄酮类化合物荧光

１．１．４双波长和导数分光光度法：用于测定吸收光谱曲线重
达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混 浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。在选择波长 时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较 接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样 方法的灵敏度会更高。如果将上述双波长分光光度计上两个 波长尽可能指近，使只相差１～２ ｎｍ，并且同时进行扫瞄，能得 到试样一阶导数吸收光谱．吸光度对波长的变化率曲线，即导

光度测定法的标准∞Ｉ。随着学科的深人发展，共振散射光谱
法、单扫示波极谱法也逐渐应用于总黄酮的含量测定。 ２药理作用
２．１

镇痛作用赵铁华等Ｈ。研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮

下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热
刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制 与中枢作用相关。银杏总黄酮（ＴＦＧ）腹腔内注射可显著抑制

作者单位：０６３０００河北省唐山市中医院骨科

万方数据

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甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体
反应数。 ２．２对心血管系统的作用 ２．２．１对抗心肌损伤的保护作用：李乐等ｐ１研究发现绞股蓝 自由基和抑制脂质过氧化过程¨“。苦菜总黄酮对四氯化碳、 乙醇所致肝损伤有明显保护作用，提示可能与苦菜总黄酮减 少肝脏谷胱甘肽耗竭，抑制肝脂质过氧化作用有关。 ２．５抗氧化、清除氧自由基作用

黄欣等¨２１研究发现枸杞总

总黄酮能减轻犬心肌梗死时的心肌缺血程度，降低缺血范围和
心肌酶学指标的活性，可保护缺血心肌。广枣总黄酮（ＴＦＣＡ） 对阿霉素（ＡＤＲ）引起大鼠心肌过氧化损伤具有保护作用。水 杉总黄酮可在不明显降低血压的情况下，防止肾性高血压大鼠 左心室肥厚的发生。银杏叶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注血 管内皮损伤有保护作用，对抗心肌缺血所引起的心肌电生理的 变化，从而预防心肌缺血所致的心律失常的发生。蒲黄总黄酮

黄酮能明显延长小鼠力竭游泳运动时间，抑制丙二醛的产生及 提高小鼠体内抗氧化酶活性，说明枸杞总黄酮具有提高小鼠运 动耐力及清除活性氧的作用。苦养麦麸皮类黄酮与天然超氧 化物歧化酶在清除氧自由基方面有着相同的作用一枝蒿总黄 酮对的作用表现高浓度清除，低浓度增强的双向作用；对（? ＯＨ）自由基的作用始终表现为浓度依赖性地清除作用，而且 清除作用很强１１“。另有研究发现竹叶的总黄酮含量及其清除 活性氧自由基的能力均与银杏叶具有可比性。黄芪总黄酮在 实验中对（?ＯＨ）及（０２）均有较强的清除作用，且清除能力 与浓度呈明显的显效关系。 ２．６抗肿瘤作用黄酮类化合物抗肿瘤作用的靶点包括细胞 周期蛋白依赖性激酶、硫氧还蛋白还原酶、基质金属蛋白酶、丝 裂原激活的蛋白激酶等。肿瘤细胞凋亡研究依据：（１）黄酮类 化合物抑制细胞增殖，主要是使细胞周期停止，对肿瘤细胞有 细胞毒作用，而对正常细胞无毒性和致突变作用，反而有抗氧 化和正向的免疫调节作用；（２）黄酮类化合物促迸肿瘤细胞凋 亡；（３）黄酮类化合物能抑制细胞信号转导过程中的酪氨酸蛋 白激酶、蛋白激酶ｃ、磷脂酰肌醇３激酶活性；（４）黄酮类化合 物具有抗炎、抗氧化压力和促进抑癌基因表达而抑制癌基因表 达的作用。汉黄芩素是从中药黄芩中提取分离得到的一个化 合物，研究表明其能促进鬼臼毒甙诱导的ＨＩ上６０、Ｊｕｒｋａｔ和肺癌 细胞的凋亡。芫花根总黄酮对小鼠Ｓ１８０肿瘤生长有显著的抑 制作用，其抗肿瘤活性是通过选择性杀死肿瘤细胞和提高外周

对实验性心肌缺血犬心肌具有保护作用Ｍ１。黄蜀葵花总黄酮
药理性预适应可通过抑制心肌脂质过氧化、抑制心肌炎症反 应，对缺血；再灌注损伤的心肌具有保护作用；显著降低心脑组 织中丙二醛和ＮＯ含量，提示黄蜀葵花总黄酮对心脑缺氧有显 著保护作用；对小鼠急性心肌缺血、缺氧损伤具有保护作用¨』。

２．２．２抗心率失常作用：苦参总黄酮能明显对抗乌头碱、哇巴
因及氯仿诱发的心率失常。黄芩茎叶总黄酮对实验性心率失 常有显著拮抗作用。 ２．２．３降血脂：银杏叶总黄酮具有降低甘油三酯和胆固醇，升 高高密度脂蛋白胆固醇和降低低密度胆固醇的作用。抗动脉 粥样硬化作用实验显示麦胚总黄酮类提取物（ＦＥＷＧ）能显著 提高实验性高脂血症大鼠血高密度脂蛋白胆固醇含量，同时显 著降低血清总胆固醇和三酰甘油含量怕Ｊ。荞麦种子总黄酮能 抑制喂饲固醇和高脂食物大鼠血清总胆固醇和三酰甘油的升 高，抑制肝脏脂质过氧化。山楂总黄酮对氧化型低密度脂蛋白 （ｏｘＬＤＬ）诱导的人内皮细胞损伤具有显著的拮抗作用，对氧化 型低密度脂蛋白促ＭＣ．ＥＣ黏附作用有显著的抑制性，降低动 脉粥样硬化发生的危险性，起到预防动脉粥样硬化发生发展的 作用。 ２．２．４抗高血压、血管壁扩张作用：银杏叶总黄酮其对血管紧 张素转化酶活性具有明显的抑制作用。并对轻、中、重度妊娠 高血压患者的血压均有下降，内皮素活性及ＮＯ含量降低，尿 蛋白减少‘”。淫羊藿总黄酮对大鼠血清中内皮素有抑制作用， 一氧化碳含量明显降低，提示淫羊藿总黄酮扩张血管。 ２．３抗凝血作用银杏黄酮、蚓激素酶均具有很好的抗凝作

血淋巴细胞数量、促进淋巴细胞的增殖和提高ＮＫ细胞的杀伤
活性来实现的¨“。木犀草素具有很强的诱导肝癌细胞凋亡 活性。 ２．７对脑血管疾病的作用 李晓红等¨刮银杏叶总黄酮对局

部缺血再灌注脑组织中ＮＲｌ ｍＲＮＡ的表达增强，与细胞凋亡密 切相关，银杏叶制剂可以明显抑制ＮＲｌｍＲＮＡ的表达，减轻细 胞凋亡。文继月等¨刮黄蜀葵花总黄酮预处理对大鼠脑缺血再 灌注损伤具有缺血预适应样的保护作用；其机制可能与促进 ＮＯ合成及抑制前列腺素Ｅ：产生有关。山楂叶总黄酮可抑制

用，但凝激酶溶栓效果优于银杏黄酮，两者合用后溶血作用无
加强，但具有较好的抗凝效果一‘。水杉总黄酮有抗血小板聚集 活性，改善血液流变性的作用，穿心莲黄酮可明显抑制二磷酸

脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，其机制可能与抑制线粒体细胞
色素Ｃ通路的凋亡有关¨ｊ。 ２．８其他
２．８．１

腺苷，花生四烯酸和肾上腺素诱导的血小板聚集，明显降低凝 血酶诱导的ＧＭＰ一１４０水平，抑制ＡＡ诱导的血小板ＴＸＢ２的释
放，并可明显升高血小板内ｃＡＭＰ的含量。

对神经系统的作用：黄酮对Ｍ一胆碱能抑制樟柳碱所致

小鼠脑记忆获得障碍、蛋白生物合成抑制剂环己酰亚胺致小鼠 脑记忆巩固障碍、中枢抑制剂乙醇致小鼠脑记忆再现障碍、小 鼠脑缺血再灌注致学习记忆功能障碍，均有明显的改善作用， 能显著提高小鼠的近期记忆和长期记忆功能。

２．４利胆及肝脏保护作用各种黄酮类化合物对化学性肝损 伤、药物性肝损伤、免疫性肝损伤、酒精性肝损伤、缺血／再灌注 性肝损伤等实验性肝损伤均有不同程度的保护作用¨…。知母
总黄酮对溴酸钾诱发的小鼠肝损伤具有一定的保护作用，可

２．８．２延缓衰老作用：淫羊藿总黄酮对于皮质酮大鼠Ｔ细胞
过度凋亡均有明显下调作用，并能对促凋亡及抗凋亡基因群 进行适度地调控。蜂胶黄酮既能明显提高脑组织抗氧化酶的 活性，又同时显著降低脑组织ＮＯ含量，提示蜂胶黄酮可以抑

以明显降低因溴酸钾引起的小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶水平，
保护因溴酸钾诱发的肝损伤其作用机制可能部分来自于清除

万方数据

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制ＮＯ的细胞毒作用，达到延缓衰老之目的。 ２．８．３对骨科方面的作用：淫羊藿总黄酮具有促进体外成骨 细胞增殖及分化成熟的作用，还可提高去势大鼠骨密度，对骨 质疏松起防治作用。杜仲总黄酮能直接促进体外成骨细胞的 增殖。野菊花总黄酮可恢复大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器 形态，降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能。 ２．８．４对免疫方面的作用：淫羊藿总黄酮对免疫功能低下小 鼠有良好免疫促进作用。黄芩茎叶总黄酮对小鼠的特异性和 非特异性免疫功能皆有一定的影响。 ２．８．５改善。肾功能作用：黄蜀葵花抑制肾内髓ＡＴＰ酶活性，从 而减少肾小管对钠的重吸收，发挥利钠利水效应。 ２．８．６抗乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）作用：黄蜀葵 花总黄酮中提取的金丝桃苷在体内外均有抗ＨＢＶ的作用，且 呈剂量依赖性。 ２．８．７修复口腔黏膜作用：黄蜀葵花中的多种黄酮类成分具 有抑菌、镇痛及抗炎消肿的作用，能治疗口腔溃疡，对疼痛也有 较好的缓解作用。沙棘叶总黄酮对细菌有较强的抑制作用， 在相同时间内，总黄酮提取液的浓度越大，抑菌率越大。同一 浓度的沙棘叶总黄酮的作用时间越长，其抑菌率也越大【１…。 参考文献
Ｉ １

４赵铁华，邓淑华，石艳华，等．黄芩茎叶总黄酮镇痛作用的实验研究． 中国中医药科技，２００１，１２：２３． ５李乐，孙晓东，高小利，等．绞股蓝总黄酮对犬急性缺血心肌的保护 作用．中国病理生理杂志，２００８。２４：３８８－３８９． ６章红燕，侯桂兰，何福根．银杏叶总黄酮和银杏内酯对心脑血管作用

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２陈丛瑾，黄克瀛，韦龙宾．色谱方法在植物黄酮含量测定中的应用．
３

１７张益娜，翁琴．沙棘叶总黄酮的抑菌性研究．农产品加工?学刊，
２００８，２５：２５－２７．

马陶陶，张群林，李俊．中药总黄酮的含量测定方法．安徽医药，
２００７．１１：１０３０—１０３２．

（收稿日期：２０１０—０３—１６）

?综述与讲座?

Ｔｈｌ ７细胞与肝脏疾病
宋胜斌魏峰周俊英
【关键词】Ｔｈｌ７细胞；白介素．１７；白介素－２２；白介素一６；肝疾病 Ｒ ５７５ 【中图分类号】 【文献标识码】Ａ 【文章编号】

１００２—７３８６（２０１０）１５—２０９６—０４

Ｔｈｌ７细胞是一类独立于Ｔｈｌ（Ｔ

ｈｅｌｐｅｒ

ｔｙｐｅ

１）、Ｔｈ２的

中的作用作一综述。
１

ｃＤ；Ｔｈ细胞亚群，在其分化过程中需要自细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕ—
ｋｉｎ

Ｔｈｌ７细胞概述 ＣＤ；Ｔ细胞根据其产生的细胞因子及生物学功能分为两

６，ＩＬ－６）和转化生长因子１３（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ

ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ

Ｂ，
ｒｅ－

ＴＧＦ－Ｂ）、ＩＩ．－２３、转录因子ＲＯＲ一７ｔ（ｏｒｐｈａｎ ｃｅｐｔｏｒ?＿ｙｔ）及ＳＴＡ乃（ｓｉｇｎａｌ

ｎｕｃｌｅａｒ ｈｏｒｍｏｎｅ

种不同的细胞亚群，以分泌ＩＬ－２、干扰素１（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＇ｙ．ＩＦＮ．．ｙ） 为特征的称为１＇１１１细胞，以分泌ＩＬ－４、ＩＬ－５为特征的称为Ｔｈ２ 细胞。Ｔｈｌ细胞主要产生Ｔｈｌ类细胞因子ＩＬ－２、肿瘤坏死因子． ｐ（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓ
ｆａｃｔｏｒ

ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ

３）参与。目前研究发现Ｔｈｌ７细胞分泌的ＩＬ．１７、ＩＬ－６、ＩＬ０２２等 细胞因子参与肝脏损伤及再生过程，在脂肪肝、自身免疫性肝 病及肝脏肿瘤中发挥重要作用，本文就Ｔｈｌ７细胞在肝脏疾病

ｐ，ＴＮＦ?Ｂ）、ＩＦＮ一１，可引起迟发型超敏反

应，活化巨噬细胞及有效的清除细胞内的病原体。Ｔｈ２细胞主 要产生ＩＬ－４、１Ｌ－５、ＩＬ－６、ＩＬ一１０、ＩＬ一１３，对ＩｇＥ的产生、嗜酸性炎症

作者单位：０６３１０２河北省唐山市，开滦医疗集团范各庄医院神经 内科（宋胜斌）；河北医科大学第三医院（魏峰、周俊英） 通讯作者：周俊英，０５００５１ 河北医科大学第三医院感染科；

反应及寄生虫感染的清除尤为重要。Ｔｈｌ７细胞的发现源于自 身免疫性疾病机制的研究。Ｔｈｌ细胞功能失调可引起严重的 炎症反应并诱发多种自身免疫性疾病。但是，ＩＦＮ．．ｙ或１ＦＮ．．ｙ 受体缺乏小鼠虽然没有ＩＦＮ－１信号，仍可发生自身免疫性疾

Ｅ—ｍａｉｌ：ｓａｒｓＩ ５６＠ｓｏｈｕ．ｃｏｒｎ

万方数据



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