重组灵芝免疫调节蛋白的安全性初步研究

发布时间：2017-04-02 11:06

  本文关键词：重组灵芝免疫调节蛋白的安全性初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：重组灵芝免疫调节蛋白（rLZ-8）是从灵芝子实体中分离得到的一种真菌蛋白，，具有免疫调节功能。现已研究发现，rLZ-8具有抗肿瘤和升高体内白细胞数量的生物学活性。白细胞减少症，作为癌症化学药物治疗后的一种常见并发症，时刻困扰着全球近千万患者。目前临床使用的常见白细胞减少症治疗药物，均存在或多或少的缺点，而rLZ-8相比于这几种药物，具有毒副作用低等的优点。因此，rLZ-8作为治疗白细胞减少症的药物的研发，具备较为广阔的发展前景。 在rLZ-8研发的过程中，其安全性的研究与评价是十分重要的部分，也是进一步开发的基础。基于以上问题，本论文以白细胞减少症为适应症，进行了rLZ-8的急性毒性实验和长期毒性实验研究，具体内容总结如下： 本论文利用基因工程方法，在毕赤酵母中重组表达了rLZ-8，并通过与本课题组其他研究人员合作，在中试规模上进行了rLZ-8的发酵生产及分离纯化，获得到纯度达到99%的rLZ-8样品，为接下来的急性毒性实验和长期毒性试验提供了满足要求的受试药物。 本论文对rLZ-8进行了小鼠急性毒性实验，观察不同剂量作用下小鼠的病理反应，探求rLZ-8最大耐受量。研究发现，雄性小鼠和雌性小鼠的中毒剂量均为起效剂量的381.73倍，致死剂量存在性别差异，雄性小鼠为457.99倍，雌性小鼠耐受较强达到572.60倍，可见rLZ-8中毒剂量和致死剂量与起效剂量差距极大，其毒性较低，安全性颇具保障。 本论文还进行了rLZ-8大鼠长期毒性实验，观察不同剂量用药过程中大鼠各个指标的变化趋势，找出最合适用药剂量并观察rLZ-8对大鼠肝脏、肾脏等重要脏器的影响。研究发现，rLZ-8中低剂量为较合适用量，且rLZ-8未对大鼠肝脏、肾脏等重要脏器产生有害作用。 综上所述，在治疗白细胞减少症的过程中，rLZ-8的毒副作用极低，未对动物肝脏、肾脏等重要脏器产生有害作用。初步的研究表明，rLZ-8具备较高的安全性。
【关键词】：重组灵芝免疫调节蛋白 安全性 急性毒性 长期毒性 白细胞减少症
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R915
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 绪论12-21
• 1.1 灵芝免疫调节蛋白研究进展12-15
• 1.1.1 灵芝基本特征12
• 1.1.2 灵芝的分布与发现概况12
• 1.1.3 灵芝的药理作用12-14
• 1.1.4 灵芝免疫调节蛋白的发现与研究的开展14-15
• 1.1.5 免疫调节蛋白质生物药品发展现状15
• 1.2 白细胞减少症研究进展15-20
• 1.2.1 白细胞的生理15-16
• 1.2.2 白细胞总数升高及异常病症16-17
• 1.2.3 白细胞减少症发病病因17
• 1.2.4 白细胞减少症常用治疗方法17-20
• 1.3 论文的立题依据和内容20-21
• 第二章 rLZ-8 的制备21-31
• 2.1 实验仪器与试剂21-23
• 2.1.1 实验仪器21
• 2.1.2 实验试剂21-22
• 2.1.3 试剂配制22-23
• 2.2 实验方法23-28
• 2.2.1 rLZ-8 基因的克隆23-25
• 2.2.2 重组质粒的构建25-26
• 2.2.3 重组质粒转化酵母感受态及线性化制备筛选26
• 2.2.4 rLZ-8 酵母菌在摇瓶中的表达26
• 2.2.5 rLZ-8 中试发酵工艺的生产26-27
• 2.2.6 rLZ-8 蛋白纯化27-28
• 2.3 实验结果28-30
• 2.3.1 rLZ-8 基因克隆 PCR 结果28-29
• 2.3.2 rLZ-8 摇瓶筛选经电泳鉴定表达量29
• 2.3.3 rLZ-8 中试发酵经电泳鉴定表达量29-30
• 2.3.4 rLZ-8 蛋白纯化结果30
• 2.4 小结30-31
• 第三章 rLZ-8 小鼠急性毒性实验31-42
• 3.1 实验仪器与试剂31-32
• 3.1.1 实验仪器31
• 3.1.2 实验试剂31
• 3.1.3 试剂配制31-32
• 3.1.4 实验动物32
• 3.2 实验方法32-35
• 3.2.1 实验目的32-33
• 3.2.2 给药途径33-34
• 3.2.3 给药剂量34
• 3.2.4 观察时间及指标34-35
• 3.3 实验结果35-40
• 3.3.1 尾静脉给药途径急性毒性实验结果35-37
• 3.3.2 急性毒性实验最大耐受量检测37-40
• 3.4 讨论40-41
• 3.5 小结41-42
• 第四章 rLZ-8 大鼠长期毒性实验42-51
• 4.1 实验仪器与试剂42
• 4.1.1 实验仪器42
• 4.1.2 实验试剂42
• 4.1.3 实验动物42
• 4.2 实验方法42-43
• 4.2.1 实验目的42-43
• 4.2.2 实验周期43
• 4.2.3 实验分组43
• 4.2.4 给药方式43
• 4.2.5 观察指标43
• 4.3 实验结果43-49
• 4.3.1 SD 大鼠进食和体重增长43-44
• 4.3.2 肝肾功能检测44-47
• 4.3.3 免疫功能检测47-49
• 4.3.4 病理学检测49
• 4.4 讨论49-50
• 4.5 小结50-51
• 第五章 结论51-52
• 参考文献52-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：282365