QIC1抑制EGFR-STAT3-HKⅡ信号通路诱导肿瘤细胞凋亡的研究

发布时间：2017-04-27 04:04

  本文关键词：QIC1抑制EGFR-STAT3-HKⅡ信号通路诱导肿瘤细胞凋亡的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:表皮生长因子受体(EGFR)对人类肿瘤增殖具有重要作用,是癌症治疗的有效靶目标。本研究将对以EGFR为靶点合成的20种新的喹诺酮-吲哚酮衍生物单体进行抗肿瘤活性筛选,获得活性最强的化合物,并研究其作用机制及其对耐药肿瘤细胞的影响。方法:MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)法筛选20种喹诺酮-吲哚酮衍生物单体对人类肝癌Hep G-2细胞、人类乳腺癌MCF-7细胞、人类肺腺癌A549细胞及人类宫颈癌Hela细胞的活性,获得抗肿瘤活性最强的单体成分;流式细胞仪检测该单体化合物对肿瘤细胞周期的影响;高内涵活细胞成像系统分析该单体化合物对肿瘤细胞凋亡的影响;Western blotting检测该单体化合物对肿瘤细胞中EGFR、p-EGFR、STAT3、p-STAT3、HKⅡ蛋白及细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:1、从20种喹诺酮-吲哚酮衍生物单体中筛选出抗肿瘤活性最强的单体成分--QIC1{9-氟-3-甲基-10-(4-甲基哌嗪-1-基)-6-[(Z)-(2-羰基-1,2-二氢-3H-吲哚-3-亚甲基)甲基]-2,3-二氢-7H-[1,4]氧杂联氮基[2,3,4-ij]喹啉-7-酮}。2、QIC1对Hep G-2、MCF-7、A549细胞的抗增殖作用明显强于阳性对照苏尼替尼(Sunitinib)。QIC1对Hep G-2、MCF-7、A549细胞作用48h的IC50分别为:2.44±0.63μmol/L、1.85±0.54μmol/L、2.69±0.03μmol/L;阳性对照Sunitinib对Hep G-2、MCF-7、A549作用48 h的IC50分别为:16.66±0.93μmol/L、17.96±1.13μmol/L、8.77±1.38μmol/L。3、而QIC1对正常肝细胞QSG7701(IC50=17.91±0.14μmol/L)的毒性与阳性对照Sunitinib(IC50=17.00±0.16μmol/L)对正常肝细胞QSG7701的毒性相似。4、QIC1阻滞Hep G-2细胞周期于G2/M期,且呈剂量依赖性;QIC1使A549细胞S期细胞减少,可能抑制A549细胞DNA的合成。5、QIC1可呈剂量依赖性地诱导Hep G-2、A549及MCF-7细胞凋亡,可促使Bax表达增加,同时抑制Bcl-2表达。6、QIC1下调EGFR的活性进而影响下游的STAT3,调节HKⅡ信号通路。7、QIC1抑制人类乳腺癌耐药细胞MCF-7/DOX的增殖并增强阿霉素对MCF-7/DOX细胞的抗肿瘤活性。结论:新的喹诺酮-吲哚酮衍生物QIC1可通过EGFR-STAT3-HKⅡ通路抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡,并可逆转肿瘤细胞的耐药性。
【关键词】：喹诺酮-吲哚酮衍生物QIC1 EGFR通路 己糖激酶 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 引言11-15
• 第一部分 喹诺酮-吲哚酮衍生物抗肿瘤活性的筛选15-25
• 1.1 实验材料15-17
• 1.1.1 主要仪器15-16
• 1.1.2 细胞株16
• 1.1.3 药品与试剂16
• 1.1.4 药品与试剂配制方法16-17
• 1.1.5 喹诺酮-吲哚酮衍生物17
• 1.2 实验方法17-18
• 1.2.1 细胞培养17
• 1.2.2 MTT法筛选20种喹诺酮-吲哚酮衍生物单体的抗肿瘤活性17-18
• 1.2.3 数据处理和统计学分析18
• 1.3 实验结果18-23
• 1.4 讨论23
• 1.5 小结23-25
• 第二部分 QIC1的抗肿瘤活性及分子机制研究25-45
• 2.1 实验材料26-30
• 2.1.1 主要仪器26-27
• 2.1.2 细胞株27
• 2.1.3 药品与试剂27-28
• 2.1.4 药品与试剂配制方法28-30
• 2.1.5 QIC1及阳性对照苏尼替尼（Sunitinib）30
• 2.2 实验方法30-34
• 2.2.1 细胞培养30
• 2.2.2 MTT法检测QIC1的抗肿瘤活性30-31
• 2.2.3 细胞周期检测31
• 2.2.4 细胞凋亡检测31-32
• 2.2.5 Western Blotting32-34
• 2.2.6 统计学分析34
• 2.3 实验结果34-42
• 2.3.1 QIC1对肿瘤细胞增殖的影响34-36
• 2.3.2 QIC1对肿瘤细胞周期的影响36-37
• 2.3.3 QIC1对肿瘤细胞凋亡的影响37-40
• 2.3.4 QIC1对EGFR-STAT3-HKⅡ信号通路的影响40-42
• 2.4 讨论42-44
• 2.5 小结44-45
• 第三部分 QIC1逆转人类乳腺癌MCF-7/DOX耐药细胞的耐药性45-57
• 3.1 实验材料46-50
• 3.1.1 主要仪器46
• 3.1.2 细胞株46
• 3.1.3 药品与试剂46-47
• 3.1.4 药品与试剂配制方法47-50
• 3.1.5 QIC1及阿霉素（DOX)50
• 3.2 实验方法50-53
• 3.2.1 细胞培养50
• 3.2.2 RT-PCR50-51
• 3.2.3 Western Blotting51-52
• 3.2.4 MTT法检测QIC1对耐药肿瘤细胞生长的影响52-53
• 3.2.5 统计学分析53
• 3.3 实验结果53-55
• 3.4 讨论55-56
• 3.5 小结56-57
• 参考文献57-61
• 英文缩略词表（ABBREVIATIONS AND ACRONYMS）61-63
• 攻读学位期间发表的学术论文目录63-65
• 致谢65-66

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