二甲基塞来昔布增敏ABT-737抗胃癌的作用和机制研究

发布时间：2017-05-19 03:10

  本文关键词：二甲基塞来昔布增敏ABT-737抗胃癌的作用和机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：ABT-737是类似BH-3的小分子物质,能够抑制抗凋亡的Bcl-2家族蛋白Bcl-2,Bcl-xL和Bcl-w的活性,引起凋亡蛋白Bid, Bad及Bim等从抗凋亡蛋白中释放。ABT-737能够拮抗Bcl-2和Bcl-xL,但是和另一个抑凋亡家族蛋白Mcl-1的亲和力较小,因而在某些实体瘤中Mcl-1蛋白高表达时,造成肿瘤细胞对ABT-737耐药。本文研究了ABT-737与二甲基塞来昔布联合用药的药效学及其机制研究。方法：(1)MTT法检测ABT-737与二甲基塞来昔布(DMC)联合用药抑制人胃癌细胞增殖。(2)利用PI单染或Annexin V/PI双染法流式细胞术检测凋亡率。(3)利用JC1染色法检测线粒体膜电位变化。(4)Western blotting法检测蛋白的表达。(5)激光共聚焦检测AIF细胞内定位。(6)荧光定量PCR法检测mRNA的表达。(7)利用SiRNA技术沉默基因表达。结果：二甲基塞来昔布与ABT-737联合用药较塞来昔布联合ABT-737具有更强的的抗肿瘤作用,且二甲基塞来昔布不显著影响细胞内PGE2的水平。二甲基塞来昔布与ABT-737合用通过改变线粒体膜通透性,增强Mc1-1的降解,且与Mcl-1的蛋白水平呈明显的负相关,但不显著上调Noxa, Bim和Bak等促凋亡蛋白的水平,提示该凋亡作用可能与caspase的激活无关。进一步发现,二甲基塞来昔布与ABT-737合用能够激活AIF的核转位,最终引起两药发生协同效果。结论：二甲基塞来昔布与ABT-737联合用药通过降解细胞内的Mcl-1蛋白,促进AIF核转位,从而产生caspase非依赖凋亡。
【关键词】：ABT-737 二甲基塞来昔布 McI-1 AIF
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-13
• 一、材料与方法13-26
• (一) 实验材料13-17
• 1. 实验细胞13
• 2. 实验药品13-14
• 3. 主要实验仪器与设备14-15
• 4. 实验试剂15-17
• (二) 实验方法17-26
• 1. 细胞培养17-18
• 2. MTT实验18
• 3. 集落形成实验18-19
• 4. 流式细胞术测定细胞凋亡19
• 5. Hoechst 33342荧光染色实验19
• 6. PGE2 ELISA检测试剂盒19-20
• 7. JC-1染色测定线粒体膜电位变化20
• 8. Western Blotting法检测蛋白含量20-23
• 9. 实时荧光定量PCR法测定Mcl-1基因转录水平23-25
• 10. SiRNA技术沉默AGS和HGC-27细胞的Mcl-125
• 11. 免疫荧光25
• 12. 数据分析25-26
• 二、实验结果26-33
• (一) DMC显著增敏ABT-737抗人胃癌细胞株AGS和HGC-27的增殖26-28
• (二) DMC对人胃癌细胞AGS和HGC-27内PGE2水平无显著影响28-29
• (三) DMC联合ABT-737诱导胃癌细胞AGS和HGC-27发生凋亡29-30
• (四) DMC联合ABT-737引起胃癌细胞AGS和HGC-27的线粒体膜电位下降30
• (五) DMC与ABT-737的联合抗肿瘤作用与Mcl-1蛋白水平相关30-31
• (六) DMC联合ABT-737诱导AIF蛋白的核转运31-33
• 三、分析和讨论33-34
• 结论34-35
• 参考文献35-42
• 附图42-56
• 致谢56-57
• 文献综述57-66
• 参考文献63-66

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