共载阿霉素和EGFR siRNA的PLGA脑靶向纳米粒的制备及抗神经胶质瘤作用研究

发布时间：2017-06-21 08:02

  本文关键词：共载阿霉素和EGFR siRNA的PLGA脑靶向纳米粒的制备及抗神经胶质瘤作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：药物的联合治疗是肿瘤治疗的新策略之一。阿霉素是一种传统的肿瘤化疗药物，但同时也是P-糖蛋白（P-gp）的底物，由于脑毛细血管内皮细胞表面也存在P-gp，非常不利于阿霉素穿过血脑屏障治疗脑肿瘤。基因治疗是一种比较有希望的治疗手段。脑癌,肺癌，乳腺癌，头颈癌，肝癌等都过度表达表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)。肿瘤EGFR的表达水平与肿瘤的等级程度，不良的预后和对放疗化疗的抗性等都有着密切的关系。本课题构建了一种共载阿霉素和EGFR siRNA的靶向纳米粒递送系统，以期能够更好的治疗神经胶质瘤。课题的主要内容如下： 1. ANG-CHI的合成与表征。通过3-马来酰亚胺丙酸-N-羟基琥珀酸亚胺酯（Pr-NHS-Mal），将靶向基团（angiopep-2）接载于壳聚糖上。采用傅里叶红外光谱（FT-IR）、核磁共振（NMR）和BCA蛋白测定法分别对聚合物上的angiopep-2进行定性和定量表征，结果证实，angiopep-2成功接载于壳聚糖上。 2. ANG/PLGA/DOX/siRNA靶向载药系统的构建。通过单因素考察，确定纳米粒制备处方，制备了ANG/PLGA/DOX纳米粒载药系统，并利用投射电镜（TEM），纳米粒度和电位测定仪、紫外可见分光光度计对纳米粒的形态、粒径、电位、载药量、包封率、体外释放特征进行了表征。然后将其与荷负电荷的EGFRsiRNA孵育，得到ANG/PLGA/DOX/siRNA靶向载药系统，琼脂糖凝胶电泳显示EGFR siRNA能够很好的荷载于纳米粒上。 3. ANG/PLGA/DOX/siRNA靶向载药系统对人脑星形胶质母细胞瘤U87MG细胞的抗肿瘤活性。使用苯磺罗丹明B（SRB）法考察了空白载体以及各种载药系统对U87MG细胞存活率的影响；使用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪考察了载药系统被U87细胞摄取情况，通过流式细胞仪分析载药系统对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果显示，共载系统比单独载药系统的抗肿瘤活性更为显著，作用4h后阿霉素和siRNA能够有效的被U87MG细胞同时摄取，引起细胞凋亡。 4. ANG/PLGA/DOX载药系统小鼠体内药物动力学和组织分布研究以及载药系统透过血脑屏障能力研究。体内药物动力学和组织分布研究显示，载药系统能够提高阿霉素的药时曲线下面积（AUC），能够有效的递送药物进入脑部。 本研究主要是制备了一种共载阿霉素和EGFR siRNA的靶向纳米粒递送系统，并通过一系列实验指标考察了制剂的特征以及体外抗肿瘤活性，最后考察了载药系统的药物动力学和组织分布特征，，证实了该系统能够递送阿霉素进入脑部，对神经胶质瘤治疗具有一定应用价值。
【关键词】：聚丙交酯-乙交酯共聚物 angiopep-2 siRNA 神经胶质瘤 纳米粒
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R943
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-15
• 缩略词表15-17
• 第1章 绪论17-30
• 1.1 神经胶质瘤和血脑屏障17-18
• 1.1.1 神经胶质瘤17
• 1.1.2 血脑屏障简介17-18
• 1.2 物质透过血脑屏障的方式18-20
• 1.3 神经胶质瘤靶向纳米粒载药系统研究20-26
• 1.3.1 被动靶向纳米粒载药系统21-22
• 1.3.2 主动靶向纳米粒载药系统22-25
• 1.3.3 物理化学靶向纳米粒载药系统25
• 1.3.4 智能化多功能纳米粒载药系统25-26
• 1.4 参考文献26-30
• 第2章 制剂的制备及表征30-61
• 2.1 引言30-31
• 2.2 实验材料31-33
• 2.2.1 实验仪器31-32
• 2.2.2 实验试剂32-33
• 2.2.3 Angiopep 2 序列33
• 2.2.4 EGFR siRNA 序列33
• 2.2.5 溶液的配制33
• 2.3 实验方法33-41
• 2.3.1 制备方法的选择33-34
• 2.3.2 空白纳米粒的制备及处方筛选34
• 2.3.3 ANG CHI 的合成与表征34-36
• 2.3.4 ANG/PLGA/DOX 纳米粒的制备及制备工艺筛选36-37
• 2.3.5 ANG/PLGA/DOX 纳米粒含量测定方法的建立37-38
• 2.3.6 ANG/PLGA/DOX 纳米粒的表征38-40
• 2.3.7 ANG/PLGA/DOX/siRNA 纳米粒的制备40
• 2.3.8 ANG/PLGA/DOX/siRNA 纳米粒的表征40-41
• 2.4 数据处理41
• 2.5 实结果与讨论41-59
• 2.5.1 angiopep 2 质谱和液相色谱图41-42
• 2.5.2 空白纳米粒制备工艺筛选42-43
• 2.5.3 ANG CHI 的表征43-45
• 2.5.4 ANG/PLGA/DOX 纳米粒的制备及制备工艺筛选45-48
• 2.5.5 ANG/PLGA/DOX 纳米粒中药物含量测定方法48-50
• 2.5.6 ANG/PLGA/DOX 纳米粒的表征50-56
• 2.5.7 ANG/PLGA/DOX/siRNA 纳米粒的制备和表征56-59
• 2.6 本章小结59
• 2.7 参考文献59-61
• 第3章 制剂的体外研究61-81
• 3.1 引言61
• 3.2 实验材料61-64
• 3.2.1 实验仪器61-62
• 3.2.2 实验试剂62-63
• 3.2.3 试剂配制63-64
• 3.3 实验方法64-68
• 3.3.1 细胞的培养方法64-65
• 3.3.2 载体系统体外细胞摄取实验65
• 3.3.3 载体系统体外细胞转染率测定65-66
• 3.3.4 SRB 法测定载体系统对细胞的存活率66-67
• 3.3.5 细胞周期实验67
• 3.3.6 细胞凋亡实验67-68
• 3.4 数据处理68
• 3.5 实验结果与讨论68-79
• 3.5.1 U87MG 细胞的形态学特征68-69
• 3.5.2 载体系统对 U87MG 细胞摄取实验69-72
• 3.5.3 空白载体对细胞存活率的影响72-73
• 3.5.4 DOX 对细胞生长的抑制作用73-74
• 3.5.5 载阿霉素的纳米粒对细胞生长的抑制作用74-75
• 3.5.6 共载系统对细胞生长的抑制作用75
• 3.5.7 载药系统对细胞周期的影响75-77
• 3.5.8 载药系统对细胞凋亡的影响77-79
• 3.6 本章小结79
• 3.7 参考文献79-81
• 第4章 制剂的药动学与组织分布研究81-97
• 4.1 前言81
• 4.2 实验材料81-82
• 4.2.1 实验仪器81-82
• 4.2.2 实验试剂82
• 4.2.3 溶液的配制82
• 4.3 实验方法82-85
• 4.3.1 载药系统透过 BBB 能力的考察82-83
• 4.3.2 药物动力学和组织分布分析方法的建立83-84
• 4.3.3 小鼠体内药物动力学和组织分布研究84-85
• 4.4 数据处理85
• 4.5 实验结果与结论85-96
• 4.5.1 载药系统透过血脑屏障的情况85-87
• 4.5.2 DOX 体内分析方法的建立87-91
• 4.5.3 药物动力学参数91-93
• 4.5.4 不同时间点组织中药物分布特征93-95
• 4.5.5 药物脑靶向性评价95-96
• 4.6 本章小结96
• 4.7 参考文献96-97
• 全文总结97-98
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果98-99
• 一．教育背景98
• 二．在读期间发表的文章98
• 三．在读期间申请专利98
• 四．在读期间参加的科研项目98
• 五．在读期间获得的奖励98-99
• 致谢99

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 吕凤娇;许小平;;阿霉素纳米粒体外释放模型的拟合研究[J];计算机与应用化学;2010年07期

2 王朝辉;姜同英;张婧;王思玲;;脑靶向纳米载体系统的研究进展[J];中国生化药物杂志;2008年05期

3 吴永红;张成岗;;HIV-1TAT蛋白转导肽的研究进展[J];中国生物工程杂志;2010年10期

4 龚连生;曾雅娟;张阳德;周艳琴;陈果;李一卉;;阿霉素纳米脂质体大鼠体内的药动学研究[J];中国现代医学杂志;2010年01期

5 林苏娜;林华庆;;纳米粒作为抗肿瘤药物载体的研究进展[J];中国肿瘤临床;2013年06期

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本文编号：467970