模拟失重对比目鱼肌凋亡的影响及药物干预研究

发布时间：2017-07-07 08:14

  本文关键词：模拟失重对比目鱼肌凋亡的影响及药物干预研究

  更多相关文章： 失重 肌萎缩 血府逐瘀胶囊 丁苯酞 PI3K/AKT MAPK

【摘要】：背景与目的：失重条件下为适应环境,人和动物生理状态会发生一系列的变化,其中以骨骼肌萎缩最为显著。目前其发生的机制仍不明确且缺少特效的干预措施。因此,探讨肌肉萎缩的发生机制对肌萎缩的防治具有重要的意义。PI3K/AKT通路和MAPK通路是膜受体感受外界刺激后向胞内传导信号的主要途径,也是调节细胞分化、增殖、衰老和凋亡的关键信号途径。研究表明上述信号途径可能参与失重状态下骨骼肌萎缩的发生机制。本研究选用血府逐瘀胶囊和丁苯酞两种药物,以尾部悬吊为模拟失重模型,对模拟失重状态下骨骼肌的形态学及PI3K/AKT通路和MAPK通路相关蛋白和基因转录水平变化进行研究,以期寻找有效的失重状态下骨骼肌萎缩的干预药物。 实验方法：建立尾部悬吊大鼠模拟失重模型,40只同源雌性SD大鼠(10周龄,200-250g)随机分为对照组(CON),尾吊组(SUS),尾吊+血府逐瘀胶囊组(XFZY),尾吊+丁苯酞组(NBP)。尾吊30天,对照组及尾吊组单纯给予溶媒,血府逐瘀胶囊组剂量为25mg/kg.d,丁苯酞组剂量为20mg/kg.d,各组均每日上午八点灌胃一次。 (1)通过测量比目鱼肌湿重体质量比,横截面积,mATP酶染色,观察形态学变化。 (2)应用Western-blot及RT-PCR检测技术分析PI3K/AKT及MAPK通路中ERK. JNK通路相关蛋白及下游分子BAX、Cyto-c蛋白及转录水平变化。 (3)分别利用紫外分光光度计和TUNEL方法检测caspase-3活性和比目鱼肌纤维细胞凋亡程度。 实验结果：40只大鼠全部进入结果分析,无脱失。 (1)与对照组相比,尾吊组比目鱼肌湿重体质量比下降了56.39%。血府逐瘀组和丁苯酞组平均湿重体质量比分别较单纯尾吊组增加了14.49%和13.85%。血府逐瘀胶囊组与尾吊组差异达统计学显著差异。尾吊30天后,与对照组相比,其余三组Ⅰ型纤维比例明显减少,而药物干预后并未改善Ⅰ型纤维向Ⅱ纤维的转换。 (2)尾吊30天显著抑制了PI3K/AKT信号通路中PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及转录水平表达,增强了磷酸化GSK-3β蛋白表达。血府逐瘀胶囊组干预后提高了PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及转录水平表达,降低了磷酸化GSK-3β蛋白表达,其中对关键分子P-AKT的表达影响最大,与单纯尾吊组相比有统计学显著差异。丁苯酞组干预后,也提高了P-AKT、GRP78蛋白及转录水平表达,降低了磷酸化GSK-3β蛋白表达,但丁苯酞对GRP78的蛋白及转录水平影响最大。 (3)尾吊30天,抑制了ERK细胞保护通路中P-ERK的蛋白表达,同时增强了促凋亡的JNK通路中P-JNK蛋白表达,两种药物干预后可从两方面检测到保护作用,并且血府逐瘀胶囊保护作用优于丁苯酞组。 (4)尾吊30天比目鱼肌caspase3酶活性显著增强,肌纤维细胞凋亡增加,药物干预后caspase3酶活性较尾吊组显著降低,凋亡细胞减少,但仍高于对照组。 结论： (1)尾吊模拟失重可通过抑制PI3K/AKT、ERK信号通路及促进JNK通路相关分子表达水平,增强caspase-3活性,促进肌纤维细胞凋亡,导致比目鱼肌萎缩。 (2)血府逐瘀胶囊和丁苯酞两种药物,可能通过PI3K/AKT通路和MAPK通路对失重性肌萎缩起到保护作用。
【关键词】：失重 肌萎缩 血府逐瘀胶囊 丁苯酞 PI3K/AKT MAPK
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R85
【目录】：

• 缩略语表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 一、实验材料12-15
• 1.1 实验动物12-13
• 1.2 主要试剂和药物13
• 1.3 仪器设备13-15
• 二、实验方法15-26
• 2.1 实验分组15
• 2.2 实验方法15-25
• 2.2.1 尾吊大鼠模拟失重模型及药物制备15
• 2.2.2 标本制备15-16
• 2.2.3 组织切片制备16
• 2.2.4 组织切片化学染色16-17
• 2.2.5 Western blot检测17-19
• 2.2.6 RT-PCR检测19-23
• 2.2.7 Caspase 3活性检测23-24
• 2.2.8 TUNEL检测24-25
• 2.3 统计分析25-26
• 三、实验结果26-43
• (一) 形态学结果26-29
• 1、模拟失重对大鼠比目鱼肌湿重影响及药物干预效果26-27
• 2、模拟失重对大鼠比目鱼肌组织横截面积的影响及药物干预效果27-28
• 3、模拟失重对大鼠比目鱼肌纤维类型的影响及药物干预效果28-29
• (二) Western blot检测结果29-38
• 1、模拟失重对大鼠比目鱼肌PI3K/AKT信号通路的影响及药物干预效果29-31
• 2、尾吊模拟失重对ERK/P-ERK及JNK/P-JNK信号通路的影响及药物干预作用31-33
• 3、尾吊模拟失重对GRP78、GSK-3β的影响及药物干预作用33-35
• 4、尾吊模拟失重对凋亡通路BAX的影响及药物干预作用35-36
• 5、尾吊模拟失重对胞浆细胞色素C的影响及药物干预作用36-38
• (三) mRNA水平RT-PCR结果38-41
• (四) caspase-3活性检测结果41-42
• (五) TUNEL检测结果42-43
• 四、讨论43-54
• 4.1 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌形态学变化的影响43-46
• 4.2 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌凋亡过程的影响及药物干预作用46-48
• 4.2.1 尾吊模拟失重下大鼠比目鱼肌TUNEL检测结果及药物干预46-47
• 4.2.2 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌caspase-3活性的影响47-48
• 4.3 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌凋亡机制的影响及药物干预作用48-53
• 4.3.1 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌PI3K/AKT通路的影响及药物干预作用48-51
• 4.3.2 尾吊模拟失重对大鼠比目鱼肌MAPK通路的影响及药物干预作用51-53
• 4.4 小结与展望53-54
• 参考文献54-59
• 文献综述59-69
• 参考文献66-69
• 致谢69-70
• 个人简介70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王桂英,王齐,朱晓晶;血府逐瘀胶囊开发与研究[J];北京中医;1998年03期

2 郑献召;张三军;石莉;宋学云;郭宗艳;张勇;;丁苯酞治疗大鼠脑缺血再灌注损伤作用机制的研究[J];中国实用神经疾病杂志;2009年23期

3 洪丽;王献;;丁苯酞对急性脑梗死患者疗效及血浆NO的影响[J];中国实用神经疾病杂志;2010年15期

4 王玉香;秦荣;李丹;王景洪;;血府逐瘀汤的现代应用和实验研究进展[J];辽宁中医药大学学报;2007年06期

5 崔丽英,李舜伟,吕传真,董强,董鹏,史朗峰,黄鉴政,毛善英,张朝东,曹云鹏,聂莹雪,王维治,梁庆成,杨春晓,董为伟,李光勤,彭国光,罗祖明,何俐,万琪,韩军良,黄如训,李玲,李承宴,蒙振中;恩必普软胶囊治疗中度急性缺血性卒中的多中心开放临床研究[J];中国脑血管病杂志;2005年03期

6 王桂英,王齐,谢希钧,孙玉琴,崔素荣;血府逐瘀胶囊方解及功效[J];天津药学;1997年01期

7 任俊蝉,樊小力,宋新爱,朱永进;高频正弦波振动对失重性肌萎缩的对抗作用[J];西安交通大学学报(医学版);2003年06期

8 鄢学芬;詹瑾;黄叶宁;耿维凤;;丁苯酞的药理作用与临床评价[J];中国医院药学杂志;2008年17期

9 董颀,沈羡云,孟京瑞,汪德生,杨光华,崔伟;中长期模拟失重对血液循环状态影响的中药防护[J];中华航空航天医学杂志;1999年01期

10 种兆忠,冯亦璞;Protective effects of dl-3-n-butylphthalide on changes of regional cerebral blood flow and blood-brain barrier damage following experimental subarachnoid hemorrhage[J];Chinese Medical Journal;1998年09期

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本文编号：529415