芒柄花黄素靶向USP5蛋白的抗肿瘤作用研究

发布时间：2023-11-24 17:31

　　肝癌由于其高复发率和高转移率,死亡率一直居高不下。在肝癌的恶性演进中,上皮间充质转变发挥着重要的作用。SLUG蛋白作为上皮间充质转变中重要的转录因子,能通过抑制E-钙粘素的表达促进肿瘤细胞的上皮间充质转变。因此,SLUG及其互作蛋白可以作为开发抗肝癌药物的潜在靶点。本课题通过亲和纯化及LC-MS/MS、免疫共沉淀、免疫荧光及超高分辨等实验发现并证实去泛素化酶USP5能与SLUG互作且两者存在共定位关系。放线菌酮追踪实验及泛素化分析的结果进一步表明了USP5能够去泛素化SLUG从而稳定SLUG。进一步的细胞实验结果显示敲低USP5抑制肝癌细胞的上皮间充质转变。对肝癌样本的临床数据分析也表明,肝细胞癌组织中USP5和SLUG的转录水平明显高于正常组织。并且,两者的表达水平与肿瘤组织学分级及预后情况密切相关。另外,USP5的表达量也与EMT标志物、相关的转录因子及转移相关蛋白的表达量也有关。因此,USP5可以作为开发抗肝癌药物的靶点。通过对传统中药单体文库进行虚拟筛选,发现芒柄花黄素能特异性的结合USP5。进一步研究表明芒柄花黄素能抑制USP5去泛素化SLUG。体内及体外药效学实验结果表明芒...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    第一节 肝癌及上皮间充质转变的概述
        1.1.1 肝癌的概述
        1.1.2 上皮间充质转变的概述
    第二节 泛素化及USP5蛋白的概述
        1.2.1 泛素化简介
        1.2.2 USP5蛋白简介
    第三节 芒柄花黄素简介及药理作用
        1.3.1 芒柄花黄素简介
        1.3.2 芒柄花黄素的药理作用
    第四节 实验设计方案
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 实验内容
第二章 实验材料与方法
    第一节 实验材料
        2.1.1 实验细胞系
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 细胞耗材及仪器
        2.1.4 实验试剂的配制
    第二节 实验方法
        2.2.1 实验细胞的培养
        2.2.2 免疫印迹(WB)
        2.2.3 免疫沉淀(COIP)
        2.2.4 亲和免疫纯化和银染
        2.2.5 快速蛋白液相色谱(FPLC)
        2.2.6 免疫荧光
        2.2.7 体内去泛素化分析
        2.2.8 超高分辨实验
        2.2.9 Biacore
        2.2.10 扫描电镜
        2.2.11 迁移侵袭实验方法
        2.2.12 动物实验方法
        2.2.13 计算机模拟
        2.2.14 基因富集分析
第三章 实验结果与讨论
    第一节 USP5去泛素化SLUG促进肝癌的恶性进展
        3.1.1 SLUG与USP5互作
        3.1.2 USP5去泛素化SLUG从而稳定SLUG
        3.1.3 抑制USP5能够抑制肝癌的EMT
        3.1.4 USP5和SLUG的表达水平与肝细胞癌的恶性程度密切相关
    第二节 芒柄花黄素靶向USP5抑制其去泛素化SLUG从而抑制肝癌的恶性进展
        3.2.1 芒柄花黄素靶向USP5抑制其去泛素化SLUG
        3.2.2 芒柄花黄素抑制肝癌细胞的侵袭及转移
    第三节 讨论
第四章 结论与展望
参考文献
致谢
个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3866267