天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3细胞模型保护作用及机制的研究

发布时间：2024-02-29 19:25

　　目的:脑缺血再灌注损伤是一个复杂的病理生理过程,其中脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelium cell,BMEC)损伤占据中心地位。课题组前期研究结果显示,在整体动物实验水平上,天麻酚性成分可有效对抗缺血再灌注损伤,机制与抗炎、内皮性依赖舒张血管有关,提示天麻有效成分可能是通过抗炎,激活PI3K/AKt信号通路而发挥作用。本研究复制细胞缺糖缺氧/复糖复氧(Oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/Rep)模型,检测细胞存活率、LDH、NO、炎症介质、紧密连接(Tight junction,TJ)标志性蛋白、基质金属蛋白酶的表达,明确天麻酚性成分保护作用机制,并检测PI3K/AKt信号通路相关因子,在分子水平上进一步明确脑保护机制是否与PI3K/AKt信号通路的激活有关。方法:1.天麻酚性成分对OGD/Rep损伤b End.3细胞模型的保护作用研究1.1采用三气培养箱造成OGD/Rep损伤模型,用MTT法测定b End.3细胞存活率,选择存活率50%-60%作为造模条件。1.2复制细胞OGD/Rep损伤模...

【文章页数】：106 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文索引表
引言
实验研究
    第一部分 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞模型保护作用的研究
        1.实验材料
            1.1 实验细胞
            1.2 实验试剂
            1.3 实验仪器
            1.4 试剂配制
            1.5 药物配制
        2.实验方法
            2.1 bEnd.3 细胞的复苏、传代和冻存
            2.2 bEnd.3 细胞生长曲线测定
            2.3 不同浓度Na2S2O4对bEnd.3 细胞存活率的影响
            2.4 三气培养箱对OGD/Rep损伤b End.3 细胞存活率的影响
            2.5 天麻酚性成分对bEnd.3 细胞存活率的影响
            2.6 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞存活率的影响
            2.7 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞occludin蛋白的影响
            2.8 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞claudin-5 蛋白的影响
            2.9 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞NO的影响
            2.10 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞LDH的影响
            2.11 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞MMP-2/9 mRNA的影响
        3.数据处理
        4.实验结果
            4.1 bEnd.3 细胞株鉴定
            4.2 bEnd.3 细胞生长曲线
            4.3 不同浓度Na2S2O4对bEnd.3 细胞存活率的影响
            4.4 三气培养箱对OGD/Rep损伤b End.3 细胞存活率的影响
            4.5 天麻酚性成分对bEnd.3 细胞存活率的影响
            4.6 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞存活率的影响
            4.7 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞occludin蛋白的影响
            4.8 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞claudin-5 蛋白的影响
            4.9 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞NO的影响
            4.10 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞LDH的影响
            4.11 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞MMP-2/9 mRNA的影响
        讨论
        小结
    第二部分 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞炎性介质的影响
        1.实验材料
            1.1 实验细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 主要试剂配制
            1.5 药物配制
        2.实验方法
            2.1 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞TNF-α的影响
            2.2 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞IL-1β的影响
            2.3 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞IL-6 的影响
        3.数据处理
        4.实验结果
            4.1 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞TNF-α的影响
            4.2 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞IL-1β的影响
            4.3 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞IL-6 的影响
        讨论
        小结
    第三部分 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞PI3K/AKt信号通路的实验研究
        1.实验材料
            1.1 实验细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 主要试剂配制
            1.5 药物配制
        2.实验方法
            2.1 蛋白提取
            2.2 BCA蛋白定量
            2.3 WB实验方法
        3.数据处理
        4.实验结果
            4.1 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞AKt，e NOS蛋白的影响
            4.2 天麻酚性成分对OGD/Rep损伤bEnd.3 细胞p-AKt/AKt, p-eNOS/eNOS的影响
        讨论
        小结
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3914811