阴虚“上火”生物学标志物的筛选与鉴定及知柏地黄丸干预机制的研究

发布时间：2024-03-16 03:16

　　第一部分阴虚“上火”蛋白质生物学标志物的筛选与鉴定及知柏地黄丸干预的实验研究研究背景:知柏地黄丸是干预阴虚“上火”的经典中药方剂,应用在中医临床实践已有上千年的历史,但是其干预机制尚未明确。本研究旨在探讨阴虚“上火”血清蛋白标志物以及知柏地黄丸干预阴虚“上火”的分子生物学机制。研究方法:我们用热性中药附子、干姜、肉桂对大鼠灌胃诱导阴虚“上火”动物模型,然后用知柏地黄丸进行干预治疗,收集大鼠的血清样本,并对重要脏器和体重进行测量。应用蛋白组学iTRAQ-2DLC-MS/MS技术分析大鼠血清样本,筛选知柏地黄丸干预前后血清差异表达蛋白质,结合生物信息学分析手段探索阴虚“上火”血清蛋白标志物以及知柏地黄丸干预阴虚“上火”大鼠的作用机制。研究结果:阴虚“上火”大鼠体重显著低于正常组,知柏地黄丸干预后,大鼠体重回升。阴虚“上火”大鼠胸腺指数显著高于正常组,知柏地黄丸干预后,胸腺指数降低。在蛋白组学实验中,知柏地黄丸干预前后,大鼠血清中共出现71个差异表达的蛋白质,其中10蛋白表达显著上调,61个蛋白表达显著下调。GO分析显示这些差异蛋白主要参与免疫反应,KEGG信号通路富集分析提示差异蛋白集中在...

【文章页数】：158 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１知柏地黄丸对阴虚“上火”大鼠体重的影响??Ｆｉｇ?１．１?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＺＤＧ?ｏｎ?ｂｏｄｙ?ｗｅｉｇｈｔ?ｉｎ?ＹＤＨ?ｓｙｎｄｒｏｍｅ?ｒａｔｓ．?Ｂｏｄｙ?ｗｅｉｇｈｔ?ｗａｓ??

实验完成后，大鼠肝脏、肾上腺、脾脏和胸腺迅速取出并称重。结果显示，??模型组大鼠胸腺指数高于正常组，知柏地黄丸干预后，显著降低（／？＜０．００１）。肝??脏、肾上腺、脾脏指数无显著性差异（图１．２）。??１３??

图１．３知柏地黄丸干预前后大鼠血清差异蛋白的热图??Ｆｉｇ?１．３?Ｈｅａｔ?ｍａｐ?ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｐ?

ｉ?Ｊ?＿?＿＿?鼠?ｉ?圖?＿＿??ＣＧ?ＹＤＨＧ?ＺＤＣＧ?ＣＧ?ＹＤＨＧ?ＺＤＧＧ??图１．２正常对照组、阴虚“上火”摸型组及知柏地黄丸组大鼠重要脏器指数比较??Ｆｉｇ?１．２?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｏｒｇａｎｓ?ｗｅｉｇｈｔ?ｉｎ?ＹＤＨＧ，?ＺＤ....

图２．１小ＲＮＡ文库构建实验流程??３５??

通过特定的反转录引物进行反转录反应，然后对生成的ｃＤＮＡ序列进行ＰＣＲ扩增。??最后，对长度在１４０－１６０ｂｐ范围内的ＰＣＲ产物进行胶回收，完成小ＲＮＡ文库制备??的制备工作（图２．１）。??Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??！?ｌ－２ｈｒ?１??３，?ｌｉｇａｔｉｏｎ??ｉｊ?＼?ｈｆ?....

图２．２阴虚“上火”病人血清显著差异蛋白火山图

ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌｓ．??对阴虚“上火’’者与正常对照者血清差异表达的蛋白进行生物信息学分析，??ＧＯ生物学功能分析提示，血清差异蛋白主要集中在机体免疫反应（图２．３ａ），??ＫＥＧＧ信号通路富集分析血清差异蛋白主要富集在补体和凝血途径（图２．３ｂ....

本文编号：3929029