SALL4调控CD44在胃癌中的作用和机制研究

发布时间：2017-04-06 14:46

  本文关键词：SALL4调控CD44在胃癌中的作用和机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨人婆罗双树样基因4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)在胃癌生长和转移中的作用,揭示SALL4调控CD44的作用及机制,为阐明SALL4促癌作用提供理论基础和实验依据,并为胃癌分子诊断和治疗提供新的靶点。方法:采用慢病毒介导sh RNA基因干扰或四环素诱导sh RNA基因干扰人胃癌MGC-803细胞SALL4表达,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率;生长曲线和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞运动和迁移能力。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测SALL4基因干扰对干性相关基因表达以及信号通路活化的影响。双荧光素酶报告基因分析SALL4对CD44启动子活性影响;染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)检测SALL4蛋白与CD44启动子区域结合情况。采用生长曲线、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell迁移实验以及裸鼠皮下荷瘤实验评价CD44回补对sh RNA基因干扰SALL4胃癌细胞生长和转移的影响。结果:实时荧光定量PCR及Western blot结果表明sh RNA直接干扰或四环素诱导sh RNA基因干扰均可有效降低MGC-803细胞SALL4表达;SALL4基因干扰导致胃癌细胞增殖能力和迁移能力降低。SALL4基因减低可显著抑制干性分子Oct4、Sox2、Nanog、c-Myc和CD44基因及蛋白表达,并且可抑制ERK1/2、NF-κB和STAT3信号通路活化。双荧光素酶报告基因检测结果表明,基因干扰SALL4抑制CD44启动子活性。Ch IP实验结果表明,SALL4蛋白结合CD44启动子区-505 bp~-305 bp区域。CD44回补可逆转SALL4基因干扰引起的胃癌细胞体外增殖和迁移能力抑制以及体内肿瘤生长抑制。结论:SALL4通过上调CD44促进胃癌细胞体外增殖、迁移和体内致瘤能力。SALL4转录调控CD44是其发挥促胃癌作用的新机制。
【关键词】：SALL4 CD44 胃癌 增殖 转移
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 绪论14-24
• 1.1 干细胞因子SALL414-20
• 1.1.1 SALL4的基本生物学性质14-15
• 1.1.2 SALL4与干细胞和发育15-16
• 1.1.3 SALL4在肿瘤中的作用16-18
• 1.1.4 SALL4作用的分子机制18-20
• 1.2 细胞表面粘附分子CD4420-22
• 1.2.1 CD44的结构20-21
• 1.2.2 CD44在胃癌中的作用21-22
• 1.2.3 CD44的表达调控22
• 1.3 小结22-24
• 第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义24-27
• 2.1 研究目的24
• 2.2 研究方法24-25
• 2.3 实验设计方案25-26
• 2.4 研究意义26-27
• 第三章 shRNA干扰SALL4表达对胃癌细胞生物学特性的影响27-43
• 3.1 材料27-30
• 3.1.1 细胞株27
• 3.1.2 主要试剂27-29
• 3.1.3 主要仪器和耗材29-30
• 3.2 方法30-36
• 3.2.1 细胞培养30
• 3.2.2 慢病毒转染30
• 3.2.3 总RNA提取及逆转录PCR30-31
• 3.2.4 实时荧光定量PCR31
• 3.2.5 总蛋白提取31-32
• 3.2.6 Western blot32
• 3.2.7 细胞生长曲线32-33
• 3.2.8 平板克隆形成测定33
• 3.2.9 细胞划痕实验33
• 3.2.10 Transwell细胞迁移实验33
• 3.2.11 Tet-On诱导系统慢病毒载体构建及诱导33-35
• 3.2.12 统计分析35-36
• 3.3 结果36-41
• 3.3.1 MGC-803细胞直接干扰SALL4效率鉴定36
• 3.3.2 直接干扰SALL4表达对MGC-803细胞体外增殖能力的影响36-37
• 3.3.3 直接干扰SALL4表达对MGC-803细胞体外迁移能力的影响37-39
• 3.3.4 Tet-On系统介导SALL4干扰效率验证39
• 3.3.5 Tet-On系统介导SALL4干扰对MGC-803细胞体外增殖能力的影响39-40
• 3.3.6 Tet-On系统介导SALL4干扰对MGC-803细胞体外迁移能力的影响40-41
• 3.4 讨论41-43
• 第四章 胃癌细胞中SALL4对CD44的转录调控作用43-55
• 4.1 材料43-45
• 4.1.1 细胞株43
• 4.1.2 主要试剂43-44
• 4.1.3 主要仪器及相关耗材44-45
• 4.2 方法45-48
• 4.2.1 细胞培养45
• 4.2.2 慢病毒转染45
• 4.2.3 总RNA提取及逆转录PCR45
• 4.2.4 实时荧光定量PCR45
• 4.2.5 总蛋白提取45
• 4.2.6 Western blot45
• 4.2.7 CD44启动子区域荧光素酶报告基因载体构建45-46
• 4.2.8 荧光素酶报告基因分析46-47
• 4.2.9 ChIP47-48
• 4.2.10 统计分析48
• 4.3 结果48-52
• 4.3.1 MGC-803细胞中SALL4对下游靶基因表达的影响48-49
• 4.3.2 MGC-803细胞中SALL4对关键肿瘤信号通路的影响49-50
• 4.3.3 SALL4调控CD44荧光素酶报告基因活性50-51
• 4.3.4 SALL4蛋白结合CD44启动子区域51-52
• 4.4 讨论52-55
• 第五章 SALL4转录激活CD44表达对胃癌细胞体内外生物学特性的影响55-63
• 5.1 材料55-56
• 5.1.1 实验动物55
• 5.1.2 细胞株55
• 5.1.3 主要试剂55
• 5.1.4 主要仪器和耗材55-56
• 5.2 方法56-58
• 5.2.1 细胞培养56
• 5.2.2 慢病毒转染56
• 5.2.3 总蛋白提取56
• 5.2.4 Western blot56
• 5.2.5 生长曲线测定56
• 5.2.6 平板克隆形成测定56
• 5.2.7 细胞划痕实验56-57
• 5.2.8 Transwell细胞迁移实验57
• 5.2.9 裸鼠皮下荷瘤模型57
• 5.2.10 免疫组织化学染色57-58
• 5.2.11 肿瘤组织病理分析58
• 5.2.12 统计分析58
• 5.3 结果58-62
• 5.3.1 MGC-803 SALL4干扰细胞株CD44回补效率鉴定58
• 5.3.2 CD44回补对SALL4干扰细胞株体外增殖能力的影响58-59
• 5.3.3 CD44回补对SALL4干扰细胞株体外迁移能力的影响59-60
• 5.3.4 SALL4干扰及CD44回补对MGC-803细胞裸鼠体内成瘤能力影响60-62
• 5.4 讨论62-63
• 第六章 结论与展望63-64
• 6.1 结论63
• 6.2 展望63-64
• 参考文献64-72
• 致谢72-74
• 攻读硕士学位期间发表的科研成果及参加会议74-75
• 一、科研成果74
• 二、参加会议74-75
• 三、获奖情况75

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 杨天华,周东;基因干扰及其在神经科学的应用[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2005年03期

2 ;人类β-肌动蛋白逆转录假基因干扰RT-PCR[J];国外医学.遗传学分册;1997年04期

3 王慧;王林;宋莉;叶珏;孟宪敏;;大鼠nelin基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究[J];中国分子心脏病学杂志;2010年01期

4 吕延成;潘晓瑜;黄畅;丁娟;;UL54和UL29基因干扰对HSV-2复制的影响[J];遵义医学院学报;2014年04期

5 杨帆;赵平;;Synaptotagmin I和IV在LβT2细胞中的定位和shRNA基因干扰研究[J];现代生物医学进展;2009年02期

6 丁震宇;李泽桂;星懿展;纪华;李红丽;常智杰;;小鼠HIF-1α基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2009年03期

7 ;[J];;年期

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 通讯员 刘东红;我国RNA基因干扰技术研究获突破 “基因导弹”可抑制乳腺癌干细胞[N];医药导报;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 董渠龙;五味子乙素经Nrf2-ARE信号通路抑制苯并（a）芘对HTR-8/SVneo细胞损伤的研究[D];河北医科大学;2015年

2 纪俊明;犬Zfx/Zfy基因干扰载体构建及性控效果的观察[D];石河子大学;2015年

3 袁潇;SALL4调控CD44在胃癌中的作用和机制研究[D];江苏大学;2016年

4 安俊辉;山羊△FosB基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定[D];西北农林科技大学;2010年

5 彭强;Zfy基因干扰对小鼠性别控制的研究[D];石河子大学;2011年

  本文关键词：SALL4调控CD44在胃癌中的作用和机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：289034