溶瘤腺病毒rAd.Light治疗小鼠乳腺癌移植瘤的疗效评价及机制研究

发布时间：2024-02-19 10:25

　　乳腺癌是女性最常见的癌症,也是女性癌症死亡的主要原因。目前药物治疗存在耐药性,转移、晚期、难治性乳腺癌仍缺乏有效治疗手段。肿瘤相关的基因治疗发展迅速,其中,腺病毒(Adenovirus,Ad)载体是肿瘤基因治疗最常用的载体之一,主要分为条件复制型腺病毒和复制缺陷型腺病毒。溶瘤腺病毒属于条件复制型腺病毒,可以在肿瘤细胞中选择性复制并溶解肿瘤细胞,不影响正常细胞。但肿瘤微环境中存在抑制性免疫细胞,可抵消溶瘤病毒裂解肿瘤细胞后产生的免疫效应,抑制溶瘤腺病毒发挥作用。使用溶瘤腺病毒搭载免疫基因,可以激活机体免疫系统,增强溶瘤腺病毒的抗肿瘤作用。LIGHT是肿瘤坏死因子配体家族成员,在T细胞稳态和增殖中发挥关键作用,可选择性地诱导某些肿瘤细胞如同时表达淋巴毒素β受体(LTβR)和TR2/HVEM受体的肿瘤细胞凋亡,如231细胞,HT-29细胞,TIL1200。目前,LIGHT基因对乳腺癌的作用尚未有研究。因此,本研究的目的是评价溶瘤腺病毒r Ad.Light对乳腺癌的治疗效果并初步阐明其作用机制。首先我们需要获得r Ad.light、r Ad.Null、Ad.light和Ad.Null四种病毒。...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1.前言
2.材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 病毒及细胞
        2.1.3 主要试剂及配置
        2.1.4 仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 Ad.Light和 r Ad.Light的扩增纯化及鉴定
        2.2.2 Ad.Light和 r Ad.Light颗粒滴度和感染滴度测
        2.2.3 LIGHT对小鼠乳腺癌4T1 细胞增殖和凋亡的影响
        2.2.4 小鼠乳腺癌移植瘤模型的建立、分组及治疗
        2.2.5 溶瘤腺病毒治疗后肿瘤的体积和重量的记录
        2.2.6 肿瘤组织病理学检测
        2.2.7 肿瘤组织免疫组化分析
        2.2.8 肿瘤组织中的目的基因LIGHT、LIGHT受体及相关细胞因子的表达检测
        2.2.9 外周血T淋巴细胞表型检测
3.结果
    3.1 Ad.Light和 r Ad.Light的扩增纯化及鉴定
        3.1.1 Ad.Ligh和 r Ad.Light的扩增与纯化
        3.1.2 琼脂糖凝胶电泳鉴定Ad.Light和 r Ad.Light病毒
        3.1.3 流式细胞术检测小鼠4T1 细胞感染Ad.Light和 r Ad.Light后 LIGHT表达情况
    3.2 LIGHT对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
    3.3 r Ad.Light治疗小鼠乳腺癌移植瘤的疗效评价
        3.3.1 r Ad.Light抑制4T1 移植瘤的生长
        3.3.2 r Ad.Light促进肿瘤细胞坏死及免疫细胞浸润
    3.4 r Ad.Light治疗小鼠乳腺癌移植瘤的机制研究
        3.4.1 r Ad.Light促进肿瘤细胞凋亡及CD3+细胞浸润
        3.4.2 RT-PCR分析肿瘤组织中LIGHT基因及其受体表达
        3.4.3 RT-PCR分析肿瘤组织中炎性细胞因子表达
        3.4.4 r Ad Light治疗对T淋巴细胞表型的影响
4.讨论
5.结论
参考文献
附录
    个人简历
致谢
综述 基因治疗中常用溶瘤病毒载体的研究进展
    1 癌症基因治疗的出现
    2 基因治疗中常用的溶瘤病毒
        2.1 腺病毒
        2.2 Ⅰ型单纯疱疹病毒
        2.3 痘苗病毒
    3 总结与展望
    参考文献



本文编号：3902541