EBV转化淋巴母细胞中TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因表达检测与分析

发布时间：2024-03-01 01:32

　　[目的]前期课题组通过基因芯片检测筛选出EBV诱发淋巴瘤的3个候选关键分子,分别是TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因。本课题采用荧光定量PCR和Western blot技术检测体外EBV转化淋巴母细胞和正常人淋巴细胞中TOP2A、PBK、HIST2H2BE差异表达情况,验证前期课题组基因芯片结果,为EB病毒诱导淋巴细胞转化和淋巴瘤发生的分子机制提供实验依据。[方法]采集7例健康献血员外周静脉血并从中分离出正常人淋巴细胞,用EBV体外诱导淋巴细胞转化,构建转化的淋巴母细胞模型。提取EBV转化淋巴母细胞及配对的正常人淋巴细胞的总RNA及蛋白,应用Western blot和荧光定量PCR方法,检测TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因在7例EBV体外转化的淋巴母细胞及配对的健康成人正常淋巴细胞中的表达。[结果]本实验成功建立了7例EBV转化淋巴母细胞样细胞系,并检测了TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因在7例EBV转化淋巴母细胞及配对的正常人淋巴细胞中的表达情况。TOP2A基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞TOP2A的mRNA与正常人淋巴细胞相比,表达...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3.1倒置显微镜下的淋巴母细胞A：×20B：×40

第3章结果3.1EBV体外转化淋巴母细胞抽取7例健康成年人的外周静脉血，用淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞，加入EB病毒液及含环孢素A的全培养基接种于24孔板内。一周后镜下可见淋巴细胞开始增大变亮，部分出现抱团生长（即母细胞化），半贴壁状态，待继续生长，视....

图3.2β-actin基因在各样本中相对表达量柱状图、扩增曲线、溶解曲线

细胞中3个基因mRNA的表达，数据结果表明：EB病毒体外转化淋巴母细胞中TOP2A、PBK、HIST2H2BE的mRNA表达均比正常人淋巴细胞升高（如表3.1所示）。表3.1EB病毒转化淋巴母细胞及其配对的正常人淋巴细胞中TOP2A、PBK、HIST2H2....

图3.3TOP2A基因在各样本中相对表达量柱状图、扩增曲线及溶解曲线

ABC图3.3TOP2A基因在各样本中相对表达量柱状图、扩增曲线及溶解曲线。A：TOP2A基因转化组的相对表达量明显高于正常组，差异明显；B：TOP2A基因扩增效率在90~110%之间，相关系数R2>0.99，TOP2A基因Ct值<35，认为数据可靠；C....

图3.4TOP2A表达差异的直方图

ABC3.3TOP2A基因在各样本中相对表达量柱状图、扩增曲线及溶解曲线。OP2A基因转化组的相对表达量明显高于正常组，差异明显；B：TOP2A基因扩110%之间，相关系数R2>0.99，TOP2A基因Ct值<35，认为数据可靠；C：TOP线在83℃左....

本文编号：3915235