多发性骨髓瘤中lncRNA H19结合miR-29b-3p靶向作用MCL-1诱导硼替佐米耐药
发布时间：2024-03-20 00:41
目的研究lncRNA H19作为新型生物标志物对多发性骨髓瘤诊断、监测及预后的临床应用价值,并探索H19参与诱导硼替佐米耐药的分子机制。方法收集初诊多发性骨髓瘤患者血清标本80例、正常体检者血清67例,采用实时荧光定量PCR检测H19在两组标本中的表达差异;并与患者的相关临床指标进行统计学分析;PCR检测骨髓瘤细胞中H19的表达情况,再通过小室、CCK8及流式等技术分别进行细胞迁移、增殖、凋亡等功能试验;应用生物信息学软件预测H19的靶分子miR-29b-3p,并利用荧光素酶报告基因进行确证后进行miR-29b-3p及共转染后的功能试验;生物信息学软件预测miR-29b-3p的靶蛋白MCL-1且发现与耐药相关,运用Western Blot检测药物处理后相关凋亡蛋白的变化。结果H19在初诊患者血清中高表达,临床资料分析显示H19表达与骨损伤和总蛋白水平相关同时有助于辅助临床分期;并且在耐药复发患者中H19显著高于非耐药复发患者;细胞功能表明H19的上调促进肿瘤细胞的迁移、增殖和周期而抑制凋亡;荧光素酶报告基因显示H19可与miR-29b-3p结合,从而促进了miR-29b-3p靶蛋白MC...
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 课题来源、研究的目的和意义
1.2 国内外研究概况
1.3 论文的主要研究内容
第二章 材料与方法
2.1 研究资料及仪器设备
2.1.1 研究对象
2.1.2 主要仪器与试剂
2.2 实验流程与方法
2.2.1 骨髓磁珠分选CD138+细胞
2.2.2 血清标本收集和处理
2.2.3 血清和细胞总RNA提取
2.2.4 逆转录反应
2.2.5 实时荧光定量PCR
2.2.6 临床血清标本中H19、miR-29b-3p和MCL-1的检测
2.2.7 琼脂糖凝胶电泳
2.2.8 悬浮细胞培养
2.2.9 细胞转染
2.2.10 细胞功能试验
2.2.11 总蛋白提取
2.2.12 蛋白免疫印迹
2.2.13 核浆分离
2.2.14 FISH
2.2.15 双荧光素酶报告基因
2.2.16 统计学分析
第三章 结果
3.1 H19的血清表达及方法学评价
3.1.1 H19在血清和细胞中的表达水平
3.1.2 H19检测的方法学评价
3.1.3 H19的表达与临床相关指标的相关性
3.1.4 血清H19临床分期的应用
3.1.5 血清中H19对MM的动态监测
3.1.6 对血清H19作为MM相关诊断指标的评价
3.2 H19对MM细胞功能的影响
3.2.1 H19在MM细胞中的转染效率
3.2.2 H19促进MM细胞的迁移
3.2.3 H19促进MM细胞的增殖
3.2.4 H19延长S期加快细胞周期进程
3.2.5 H19抑制MM细胞凋亡
3.2.6 细胞凋亡相关蛋白检测结果
3.3 H19靶miRNA的预测及验证
3.3.1 H19在MM细胞中的定位
3.3.2 miR-29b-3p作为H19的靶miRNA
3.3.3 miR-29b-3p在MM细胞和血清中的表达水平
3.3.4 H19与miR-29b-3p在血清中的表达呈负相关
3.3.5 双荧光素酶报告基因证实H19与miR-29b-3p的结合
3.4 miR-29b-3p对MM细胞的功能影响
3.4.1 miR-29b-3p在MM细胞中的转染效率
3.4.2 miR-29b-3p抑制MM细胞的恶性表型
3.4.3 细胞凋亡相关蛋白检测结果
3.5 H19竞争结合miR-29b-3p对MM细胞迁移、增殖和凋亡的影响
3.5.1 H19竞争结合miR-29b-3p而促进MM细胞迁移
3.5.2 H19竞争结合miR-29b-3p而促进MM细胞增殖
3.5.3 H19竞争结合miR-29b-3p而抑制MM细胞凋亡
3.5.4 细胞凋亡相关蛋白检测结果
3.6 MCL-1的异常增多诱导骨髓瘤细胞对硼替佐米的耐药
3.6.1 miR-29b-3p靶蛋白的MCL-1
3.6.2 BTZ耐药的MM患者血清中H19/miR-29b-3p/MCL-1的表达
3.6.3 MCL-1的mRNA和蛋白水平的验证
3.6.4 H19/miR-29b-3p调控MCL-1的表达
3.6.5 H19/miR-29b-3p/MCL-1调控网参与调控MM细胞对BTZ的耐药
3.6.6 不同浓度BTZ对细胞增殖的影响
3.6.7 H19/miR-29b-3p/MCL-1调控网抑制凋亡而降低细胞对BTZ敏感性
3.6.8 凋亡相关蛋白的检测结果
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
英文缩写词表
综述
综述参考文献
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目
A：在国内外刊物上发表的论文
B：所参加的项目
致谢
本文编号：3932696
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 课题来源、研究的目的和意义
1.2 国内外研究概况
1.3 论文的主要研究内容
第二章 材料与方法
2.1 研究资料及仪器设备
2.1.1 研究对象
2.1.2 主要仪器与试剂
2.2 实验流程与方法
2.2.1 骨髓磁珠分选CD138+细胞
2.2.2 血清标本收集和处理
2.2.3 血清和细胞总RNA提取
2.2.4 逆转录反应
2.2.5 实时荧光定量PCR
2.2.6 临床血清标本中H19、miR-29b-3p和MCL-1的检测
2.2.7 琼脂糖凝胶电泳
2.2.8 悬浮细胞培养
2.2.9 细胞转染
2.2.10 细胞功能试验
2.2.11 总蛋白提取
2.2.12 蛋白免疫印迹
2.2.13 核浆分离
2.2.14 FISH
2.2.15 双荧光素酶报告基因
2.2.16 统计学分析
第三章 结果
3.1 H19的血清表达及方法学评价
3.1.1 H19在血清和细胞中的表达水平
3.1.2 H19检测的方法学评价
3.1.3 H19的表达与临床相关指标的相关性
3.1.4 血清H19临床分期的应用
3.1.5 血清中H19对MM的动态监测
3.1.6 对血清H19作为MM相关诊断指标的评价
3.2 H19对MM细胞功能的影响
3.2.1 H19在MM细胞中的转染效率
3.2.2 H19促进MM细胞的迁移
3.2.3 H19促进MM细胞的增殖
3.2.4 H19延长S期加快细胞周期进程
3.2.5 H19抑制MM细胞凋亡
3.2.6 细胞凋亡相关蛋白检测结果
3.3 H19靶miRNA的预测及验证
3.3.1 H19在MM细胞中的定位
3.3.2 miR-29b-3p作为H19的靶miRNA
3.3.3 miR-29b-3p在MM细胞和血清中的表达水平
3.3.4 H19与miR-29b-3p在血清中的表达呈负相关
3.3.5 双荧光素酶报告基因证实H19与miR-29b-3p的结合
3.4 miR-29b-3p对MM细胞的功能影响
3.4.1 miR-29b-3p在MM细胞中的转染效率
3.4.2 miR-29b-3p抑制MM细胞的恶性表型
3.4.3 细胞凋亡相关蛋白检测结果
3.5 H19竞争结合miR-29b-3p对MM细胞迁移、增殖和凋亡的影响
3.5.1 H19竞争结合miR-29b-3p而促进MM细胞迁移
3.5.2 H19竞争结合miR-29b-3p而促进MM细胞增殖
3.5.3 H19竞争结合miR-29b-3p而抑制MM细胞凋亡
3.5.4 细胞凋亡相关蛋白检测结果
3.6 MCL-1的异常增多诱导骨髓瘤细胞对硼替佐米的耐药
3.6.1 miR-29b-3p靶蛋白的MCL-1
3.6.2 BTZ耐药的MM患者血清中H19/miR-29b-3p/MCL-1的表达
3.6.3 MCL-1的mRNA和蛋白水平的验证
3.6.4 H19/miR-29b-3p调控MCL-1的表达
3.6.5 H19/miR-29b-3p/MCL-1调控网参与调控MM细胞对BTZ的耐药
3.6.6 不同浓度BTZ对细胞增殖的影响
3.6.7 H19/miR-29b-3p/MCL-1调控网抑制凋亡而降低细胞对BTZ敏感性
3.6.8 凋亡相关蛋白的检测结果
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
英文缩写词表
综述
综述参考文献
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目
A：在国内外刊物上发表的论文
B：所参加的项目
致谢
本文编号：3932696
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