GPER信号通路在雌激素诱导乳腺上皮细胞转化中的作用

发布时间：2017-06-12 06:09

  本文关键词：GPER信号通路在雌激素诱导乳腺上皮细胞转化中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察17-β雌二醇(17β-estradiol,E2)和G1诱导乳腺上皮细胞MCF-10A转化和局部黏着斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)表达变化,以及G蛋白偶联受体(G protein coupled estrogen receptor,GPER)在上述效应中的介导作用,深入探讨雌激素生物学作用的信号机制,为临床上探索预防乳腺癌的高效方法提供实验依据。方法:以雌激素受体(Estrogen receptor,ER)阴性、GPER阳性MCF-10A乳腺癌细胞为研究模型,分为DMSO(对照)、E2、G1、G15、E2+G15、G1+G15六个组,连续处理模型细胞11个处理周期,建立转化细胞模型。采用蛋白印迹法检测蛋白表达变化、软琼脂集落形成实验检测细胞非贴壁依赖集落形成能力、伤口愈合实验检测细胞迁移、MTT法观察细胞生长、siRNA沉默靶基因表达、qRT-PCR检测目的基因mRNA表达水平。结果:1)E2和G1连续刺激MCF-10A细胞11代后,细胞生长速度明显增快(与对照组相比,E2和G1组分别增加40.64%和39.05%,**P0.01)、接触抑制性消失(细胞胞体变大、呈梭形生长、增殖速度加快);细胞迁移显著增快(48 h时,与对照组相比,E2组和G1组细胞迁移率分别增加100.02%和100.78%,**P0.01),图3A);与对照组相比,E2组G1组软琼脂集落形成率分别增加173.08%和153.85%,**P0.01,图3B);2)E2和G1上调GPER在乳腺上皮细胞MCF-10A中的蛋白及mRNA表达,与对照组相比,E2组、G1组GPER蛋白表达分别上调109.58%(**P0.01)和60.55%(*P0.05);与对照组相比,E2组GPER mRNA表达上调117.83%(*P0.05)。3)GPER抑制剂G15可逆转E2和G1诱导的细胞转化,表现为生长速度降低、细胞接触抑制、迁移减慢、软琼脂集落形成率低;4)E2和G1可诱导FAK的表达,该效应可被G15明显抑制;siRNA沉默FAK可使E2转化细胞迁移降低22.61%(**P0.01)。结论:E2和G1均可诱导MCF-10A乳腺上皮细胞的转化;E2和G1可上调GPER的mRNA和蛋白质表达水平;E2诱导MCF-10A细胞转化与GPER信号通路有关,而FAK可能在GPER下游发挥作用。
【关键词】：雌激素 转化 G蛋白偶联雌激素受体 乳腺上皮细胞 局部黏着斑激酶
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 略缩词表8-9
• 引言9-11
• 材料与方法11-25
• 结果25-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-51
• 参考文献49-51
• 作者简历51-52
• 致谢52-53
• 学位论文数据集53

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本文编号：443420