Rab3D在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用

发布时间：2017-06-22 02:03

  本文关键词：Rab3D在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景食管癌是我国常见恶性肿瘤之一,病理类型约90%为鳞癌。据Chen W[1]等人统计表明,肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、食管癌是5种常见的消化道肿瘤,其中肺癌、肝癌、胃癌和食道癌是我国癌症死亡的主要原因。近几年来随着手术、放化疗技术的不断提高,但是食管癌发病率及死亡率仍然很高。尤其食管鳞癌仍缺乏临床确切的治疗靶点。Rab3D为RAS癌基因家族成员之一,为鸟苷酸磷酸酶(guanosine triphosphate,GTP)结合蛋白,在人体组织中广泛表达,尤其在癌细胞系和原发肿瘤中表达明显较高。但针对Rab3D对食管鳞癌发生、发展的具体研究尚未见报道过。目的本研究通过免疫组织化学技术分析20例食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管粘膜组织及64例食管鳞癌组织中Rab3D蛋白的表达差异及临床病理学意义。构建pc DNA3-Rab3D重组质粒与Rab3D-si RNA干扰序列,转染至食管鳞癌细胞中,上调或下调食管鳞癌细胞中Rab3D蛋白的表达,通过MTT与Western Blot实验检测Rab3D蛋白表达的变化对食管鳞癌细胞增殖能力的影响及对细胞中Cyclin D1表达的影响。从而探讨Rab3D在食管鳞癌组织中的意义及对食管鳞癌细胞增殖的影响及可能机制。以期为食管鳞癌的靶向治疗及病情评估提供新的方法与思路。方法1.Rab3D在食管鳞癌细胞癌中的表达及其临床病理学意义选取20例食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管粘膜组织及含有44例食管鳞癌标本的组织芯片,运用免疫组织化学技术检测Rab3D蛋白在20例食管鳞癌组织中的表达差异及44例食管鳞癌组织中的临床病理学意义。2.MTT实验检测Rab3D对食管鳞癌细胞增殖的影响构建真核表达重组质粒pc DNA3-Rab3D及Rab3D-si RNA,经脂质体介导将pc DNA3-Rab3D重组质粒转染至Rab3D蛋白表达较低的食管鳞癌细胞中,通过MTT、Western Blot等方法探讨Rab3D蛋白的过表达对食管鳞癌细胞增殖的影响;将Rab3D-si RNA转染至Rab3D蛋白表达较高的食管鳞癌细胞中,通过MTT、Western Blott等方法观察降低Rab3D蛋白的表达对食管鳞癌细胞增殖的影响。3.Western blot实验检测Rab3D蛋白表达变化对细胞中Cyclin D1蛋白表达的影响将真核表达重组质粒pc DNA3-Rab3D及Rab3D-si RNA(Rab3D小干扰RNA)转染入Rab3D蛋白表达较低的两株细胞株及Rab3D蛋白表达较高的两株细胞株中,通过Western Blot实验探讨Rab3D蛋白表达的改变对食管鳞癌细胞中Cyclin D1蛋白表达的影响,从而探讨Rab3D对食管鳞癌细胞增殖的可能机制。结果1.Rab3D在食管鳞癌细胞癌中的表达及其临床病理学意义20例正常食管粘膜组织Rab3D蛋白高表达率为10%(2/20),癌旁组织中Rab3D蛋白高表达率为30%(6/20),食管鳞癌组织中Rab3D蛋白高表达率为90%(18/20)。三组两两对比,差异均有显著统计学意义(P0.05)。64例食管鳞癌组织中Rab3D蛋白的表达分析:TNM分期中早期(Ⅰ+Ⅱ期)食管鳞癌组织中Rab3D高表达率为38.70%(12/31),晚期(Ⅲ+Ⅳ期)食管鳞癌组织中Rab3D高表达率为66.67%(22/33),两者相比有显著统计学意义(P0.05)。无淋巴结转移食管鳞癌组织Rab3D高表达率为37.93%(11/29),有淋巴结转移食管鳞癌组织Rab3D高表达率65.71%(23/35),两者相比有显著统计学意义(P0.05)。2.MTT实验检测Rab3D对食管鳞癌细胞增殖的影响MTT结果显示:转染Rab3D质粒的食管鳞癌细胞株增殖率明显高于转染空载体的对照组细胞的增值率;转染Rab3D-si RNA的食管鳞癌细胞株增殖率明显低于转染阴性对照的阴性对照组细胞的增值率,两者相比有显著统计学意义(P0.05)。3.Western Blot实验检测Rab3D蛋白表达的变化对细胞中Cyclin D1蛋白表达的影响Western Blot结果显示,KYSE410、KYSE450细胞转染Rab3D组Cyclin D1蛋白较本细胞株对照组增高,差异有统计学意义(P0.05);EC109、EC9706细胞转染si RNA组的Cyclin D1蛋白较本细胞株阴性对照组降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论Rab3D的表达与食管鳞癌癌分化程度及食管鳞癌临床分期、淋巴结转移明显相关。Rab3D的表达对食管鳞癌细胞的增殖能力具有促进作用。其机制可能与促进Cyclin D1的表达有关。因此,我们认为Rab3D可能成为预测食管鳞癌进展程度的指标,可能成为食管鳞癌临床治疗的靶点。
【关键词】：食管鳞癌 Rab3D 增殖 免疫组织化学
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 1 材料与方法14-28
• 2 结果28-37
• 3 讨论37-41
• 4 结论41
• 参考文献41-44
• 综述 Rab蛋白与肿瘤发生、发展的关系44-57
• 参考文献51-57
• 附录57-58
• 攻读学位期间发表文章情况58-59
• 致谢59-61
• 个人简历61

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本文编号：470427