共载长春新碱和神经酰胺的脂质体的抗肝癌作用研究

发布时间：2017-07-15 13:01

  本文关键词：共载长春新碱和神经酰胺的脂质体的抗肝癌作用研究

  更多相关文章： 脂质体 长春新碱 ceramide 自噬

【摘要】：纳米技术是化疗领域的重大突破,也是当前的研究热点,针对纳米载体的修饰克服普通化疗药物细胞毒性强和体内循环时间短的缺点。长春新碱是一种肝癌常用的化疗药物,它能够抑制细胞自噬,损坏细胞的保护性自噬过程。Ceramide能够引起线粒体性自噬,促进功能障碍的线粒体通过自噬降解,两者联用可以使细胞自噬阻断,使细胞死亡。本研究在体外对两种游离药物对自噬蛋白的影响进行了测定,发现VCR能够抑制LC3和p62的表达,证明其抑制自噬过程的成熟,而ceramide能够使LC3表达增加,p62表达下降,说明可以诱导自噬过程的发生。利用两种药物在体外的联合杀伤实验结果,我们设计了脂质体配方。然后,利用乙醇注入法和p H梯度法实现了长春新碱和ceramide的共载,对制备的脂质体进行纳米表征的测定,判断脂质体稳定性。体外细胞毒性实验实验发现纳米药物Lip-VCR-Cer及Lip-VCR对肝癌细胞的杀伤效果较游离VCR和游离VCR+ceramide的效果而言要弱。而对于不同处理时间的细胞存活率,不存在统计学差异。与游离药物不同,脂质体通过细胞内吞作用进入细胞缓慢释放发挥作用,到达肿瘤细胞的VCR和ceramide浓度增加,使药物的利用率上升,增加对细胞的作用,而游离细胞对细胞的作用快速而短暂,细胞毒性作用迅速体现。Lip-VCR-Cer的杀伤作用大于Lip-VCR,游离VCR+Ceramide的杀伤作用大于游离VCR,这可能与Ceramide对细胞发挥的作用有关,Ceramide在细胞内能够通过特定信号通路诱导自噬,引起自噬蛋白LC3的表达增加,自噬流标志蛋白p62表达降低,发挥诱导细胞自噬的保护性作用。Ceramide通过不同的机制诱导保护性自噬和致死性自噬,保护性自噬实质为线粒体自噬。线粒体能够通过某种自噬的形式选择性降解功能受损的线粒体,避免功能异常的线粒体产生活性氧物质增多,不利于细胞生长,这种保护性自噬使肿瘤细胞能够适应内外环境刺激,促进肿瘤的生长,而VCR的存在使其诱导的保护性作用抑制,使细胞不能适应环境刺激,发生死亡。这种自噬诱导剂的存在使肿瘤细胞对化疗药敏感性增强,使VCR与Ceramide联用产生了更强的杀伤效果。结论:Lip-VCR-Cer与Lip-VCR在基本表征,体外释放和体外细胞毒性方面不存在统计学意义的差异。在体外杀伤效果弱于游离VCR和游离VCR+ceramide的细胞杀伤效果,四种药物处理组的杀伤效果VCR+CeramideVCRLip-VCR-CerLip-VCR。VCR与Ceramide联用增强了细胞杀伤效果,这可能与VCR抑制了ceramide诱导的保护性自噬作用有关。四种药物处理方法在体内抑制肿瘤的效果区别需要通过后续的体内实验进行验证。
【关键词】：脂质体 长春新碱 ceramide 自噬
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-13
• 第一部分 游离药物影响肝癌自噬蛋白的表达及体外细胞毒性研究13-25
• 一、实验材料及仪器13-16
• 二、实验方法16-19
• 三、实验结果19-23
• 四、小结及结果讨论23-25
• 第二部分 共载长春新碱和神经酰胺的脂质体的制备及基本表征25-35
• 一、实验材料及仪器25-27
• 二、实验方法27-30
• 三、实验结果30-33
• 四、小结与结果讨论33-35
• 第三部分 共载VCR和CERAMIDE脂质体的体外细胞毒性35-40
• 一、实验仪器和材料35-36
• 二、实验方法36-37
• 三、实验结果37-38
• 四、小结及结果讨论38-40
• 全文小结40-42
• 参考文献42-45
• 综述 自噬在肝癌中的作用：分子机制和潜在的治疗靶点45-76
• 参考文献58-76
• 在读期间发表论文和参加工作情况说明76-77
• 致谢77

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本文编号：543955