神经源性分化因子（NeuroD）对小鼠放射性肠损伤的治疗作用及其机制研究

发布时间：2017-07-18 02:10

  本文关键词：神经源性分化因子（NeuroD）对小鼠放射性肠损伤的治疗作用及其机制研究

  更多相关文章： Neuro D 辐射损伤 放射性肠损伤

【摘要】：一、Neuro D-EGFP融合蛋白的表达、纯化及跨膜转导作用的研究【目的】构建神经源性分化因子Neuro D与绿色荧光蛋白EGFP的融合蛋白,并研究其跨膜转导作用。【方法】构建Neuro D-EGFP原核表达载体,利用宿主大肠杆菌BL21(DE3)表达重组NeuroD-EGFP融合蛋白,再利用层析柱纯化得到重组Neuro D-EGFP融合蛋白。利用荧光显微镜等观察Neuro D-EGFP融合蛋白的跨膜转导能力。【结果】成功构建了Neuro D-EGFP原核表达载体,应用原核表达系统成功表达和纯化融合蛋白,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明得到了Neuro D-EGFP融合蛋白。在IEC-6及RKO细胞上清中加入Neuro D-EGFP融合蛋白后,观察发现Neuro D-EGFP融合蛋白发出的绿色荧光聚集在细胞内部。对小鼠进行腹腔注射Neuro D-EGFP融合蛋白,5小时后在荧光显微镜下发现绿色荧光聚集在小鼠肠道上皮细胞内。【结论】成功表达并纯化得到了重组的Neuro D-EGFP融合蛋白,并验证了其跨膜转导能力。二、Neuro D-EGFP融合蛋白对小鼠放射性肠损伤的治疗作用【目的】探讨Neuro D-EGFP融合蛋白对小鼠放射性肠损伤的治疗作用。【方法】C57小鼠分两批次,每批次随机分为PBS组、EGFP组、Neuro D-EGFP组,两批次分别给予8Gy、9Gyγ线全身照射,观察并记录小鼠的体重变化及生存情况,绘制生存曲线。取9Gyγ线全身照射三组小鼠的肠组织,制备病理切片,应用HE染色观察Neuro D-EGFP融合蛋白对辐射后小鼠肠道病理形态学的影响,应用TUNEL染色观察其对辐射后小鼠肠道隐窝凋亡细胞数目的影响,应用Ki-67染色观察其对小鼠肠道隐窝增殖细胞数目的影响,探讨Neuro D-EGFP融合蛋白对辐射后肠道组织的治疗作用。【结果】与PBS组及EGFP组相比,Neuro D-EGFP融合蛋白改善了8Gyγ线照射后小鼠的体重并提高了生存率。对9Gyγ线全身照射后的小鼠肠道组织进行分析,发现与PBS组和EGFP组相比,Neuro D-EGFP组小鼠肠道绒毛高度、隐窝深度及隐窝数目均大于其他两组(F=49.49,16.72,10.32,P0.01),同时肠道隐窝凋亡细胞数目较其他两组少(F=42.39,P0.01),肠道隐窝Ki-67(+)细胞数目较多(F=33.21,P0.01)。【结论】Neuro D-EGFP融合蛋白促进了辐射后肠道绒毛及隐窝的修复,减少了辐射引起的肠道隐窝细胞凋亡并促进了其增殖,对放射性肠损伤具有治疗作用。三、Neuro D-EGFP融合蛋白对小鼠放射性肠损伤治疗作用的机制研究【目的】探索Neuro D-EGFP融合蛋白对小鼠放射性肠损伤治疗作用的机制。【方法】取9Gy照射后12h EGFP和Neuro D-EGFP处理小鼠的肠组织,应用基因表达谱芯片筛选两种处理小鼠肠组织的差异表达基因,应用qRT-PCR对差异表达基因Enpp7、Mbl2、Slc13a1和Slc40a1进行了验证。通过筛选Neuro D靶向基因,应用免疫组化的方法探索Neuro D-EGFP融合蛋白对辐射后小鼠肠道组织中组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(Timp-1)表达的影响。【结果】小鼠肠道组织基因芯片表明Neuro D可影响多种基因的表达及信号通路。使用qRT-PCR验证了差异表达的基因。GO及KEGG富集分析显示Neuro D差异表达基因参与多个生物过程和信号通路。Neuro D可以增加辐射后小鼠肠道组织中具有抗凋亡作用的Timp-1的表达,初步阐明NeuroD对放射性肠损伤治疗作用的分子机制。【结论】Neuro D治疗放射性肠损伤的机制可能是通过诱导Timp-1的高表达,进而减轻了辐射后小鼠肠道隐窝的凋亡,促进辐射后小鼠肠道组织的修复。
【关键词】：Neuro D 辐射损伤 放射性肠损伤
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-12
• 参考文献12-15
• 第一部分 NeuroD-EGFP融合蛋白的表达、纯化及跨膜转导作用15-32
• 前言15
• 材料和方法15-25
• 一、 材料和仪器15-17
• 二、 实验方法17-25
• 结果25-30
• 一、 融合蛋白的表达和纯化25-27
• 二、 NeuroD-EGFP融合蛋白体外进入细胞内27-28
• 三、 NeuroD-EGFP融合蛋白体内进入小肠上皮细胞28-29
• 四、 不同辐射剂量对小鼠肠道组织NeuroD蛋白表达的影响29-30
• 讨论30-32
• 第二部分 NeuroD-EGFP融合蛋白对放射性肠损伤的治疗作用32-48
• 前言32-33
• 材料和方法33-38
• 一、 材料和仪器33-34
• 二、 实验方法34-38
• 结果38-45
• 一、NeuroD-EGFP融合蛋白对不同γ线辐射后小鼠一般情况、体重及生存期的影响38-41
• 二、 大体观察NeuroD-EGFP融合蛋白对辐射后小鼠肠道的影响41
• 三、 NeuroD-EGFP融合蛋白对辐射后小鼠肠道病理形态的影响41-43
• 四、 NeuroD-EGFP融合蛋白对辐射后小鼠肠道细胞凋亡的影响43-44
• 五、 NeuroD-EGFP融合蛋白对辐射后小鼠肠道细胞增殖的影响44-45
• 讨论45-48
• 第三部分 NeuroD-EGFP融合蛋白对放射性肠损伤治疗作用的机制研究48-58
• 前言48
• 材料和方法48-51
• 一、 材料和仪器48-49
• 二、 实验方法49-51
• 结果51-56
• 一、 基因芯片筛选差异表达的基因51-53
• 二、 NeuroD靶基因的GO、KEGG富集分析53-55
• 三、 qRT-PCR验证差异表达基因55-56
• 四、NeuroD-EGFP融合蛋白对辐射后小鼠肠道组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（Timp-1）表达的影响56
• 讨论56-58
• 参考文献58-63
• 结论63-64
• 创新性64-65
• 综述 放射性肠炎的研究及治疗进展65-85
• 参考文献75-85
• 中英文缩略词85-87
• 发表论文及其他87-88
• 致谢88-89

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吴予平;赵发;;闭合性肠损伤[J];河北医学院学报;1987年05期

2 万洪武;肠损伤31例临床分析[J];河南医药信息;2002年08期

3 陈亚光,陈少臣,冯平;医源性左半结(直)肠损伤Ⅰ期处理的体会[J];中国内镜杂志;1998年04期

4 杨超;张晓梅;宫媛;王昌正;韩颖;吴本俨;;间充质干细胞移植对放射性肠损伤修复作用的实验研究[J];生物化学与生物物理进展;2013年03期

5 于翕珊;;闭合性肠损伤62例分析[J];贵州医药;1983年05期

6 李承惠;张秀;乔东红;;大肠异物及合并肠损伤患者的护理[J];中国全科医学;2010年S1期

7 石汉平,闻英,张策,薛琪,雷尚通;胰酶在创伤/失血性休克后肠损伤中的作用[J];第一军医大学学报;2004年10期

8 叶金朝 ,李峙 ,叶菲;不容忽视的药源性肠损伤[J];世界临床药物;2003年02期

9 郑曙云;MAPK信号传导通路与肠损伤后黏膜上皮修复[J];中国危重病急救医学;2004年01期

10 周东;梁道明;张毅;赵辉;陈嘉勇;;迟发性空肠损伤1例分析[J];中国误诊学杂志;2007年18期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 李承惠;张秀;乔东红;;大肠异物及合并肠损伤患者的护理[A];北京结直肠肛门病学术交流会暨卢克捷学术思想研讨会论文集[C];2012年

2 杜利静;刘佳蕙;马辛;方捷;宋正梅;陈欣欣;相锟;崔阳冬;王艳雯;王海芳;;肠损伤对小鼠摄入纳米氧化锌的影响[A];中国毒理学会第六届全国毒理学大会论文摘要[C];2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 杜傲男;神经源性分化因子（NeuroD）对小鼠放射性肠损伤的治疗作用及其机制研究[D];苏州大学;2016年

2 宋祥福;骨髓间充质干细胞对放射性肠损伤修复作用的实验研究[D];吉林大学;2008年

3 黄庆;经血管内皮细胞生长因子刺激的骨髓间充质干细胞治疗急性放射性肠损伤的实验研究[D];福建医科大学;2014年

4 顾源;Krüppel-like factor 5在放射性肠损伤及其修复过程中作用的初步研究[D];苏州大学;2013年

5 李文祥;急进高原大鼠肠损伤后自噬变化的初步研究[D];兰州大学;2014年

6 金鑫;硫酸镁对幼鼠肠缺血—再灌注肠损伤的保护作用[D];大理学院;2013年

，

本文编号：555554