miR-146a对去势抵抗性前列腺癌自噬的调控及其调控通路的初步探讨

发布时间：2017-07-18 12:11

  本文关键词：miR-146a对去势抵抗性前列腺癌自噬的调控及其调控通路的初步探讨

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【摘要】：目的本实验通过观察去势抵抗性前列腺癌患者标本中癌组织内自噬相关蛋白的表达,并在体外实验中研究miR-146a对去势抵抗性前列腺癌的白噬水平的影响,并初步探讨miR-146a对去势抵抗性前列腺癌调控自噬的分子机制。方法1、应用脂质体Lipofactmin2000转染miR-146a和miRNA阴性对照(negative control, NC)至去势抵抗性前列腺癌细胞系(DU-145和PC3细胞系),分别收集处理后6h、12h、24h、48h、72h的前列腺癌细胞,制成电镜标本观察实验组和对照组细胞的自噬超微结构,并进行对比。2、将发生自噬时间段的前列腺癌细胞系培养并提取蛋白,运用Western blotting检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)的胞浆型(LC3-I)和膜型(LC3-II)的表达量改变3、临床收集去势抵抗性前列腺癌(castration resistant prostate cancer,CRPC)患者经尿道前列腺电切病理标本共6例,按照Gleason评分等于7分的1例和等于8分的3例以及大于8分的2例,用免疫组化的方法观察6例标本癌组织和癌旁组织自噬相关蛋白表达的改变4、应用脂质体Lipofactmin2000转染分别miR-146a和对照的miRNA到相应前列腺癌细胞系,应用免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3的表达。结果1、将转染miR-146a后6h、12h、24h、48h、72h的DU-145和PC3细胞系制成电镜标本发现DU-145转染miR-146a24小时后实验组自噬体明显增加,提示miR-146a对DU-145细胞系有促进自噬的作用,PC-3细胞系各个时间段都无明显差别。2、转染24小时后DU-145细胞系的LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值是对照组两倍,提示自噬水平增强。3、将6例去势抵抗性前列腺癌患者的标本进行免疫组化检测发现癌组织的自噬水平较癌旁组织低,提示去势抵抗性前列腺癌miR-146a的低水平导致自噬水平低。4、在荧光显微镜下检测转染,miR-146a的前列腺癌细胞系(DU-145)观察到LC3表达增加。结论：1、miR-146a对去势抵抗性前列腺癌细胞系DU-145有促进自噬的作用,自噬发生的高峰时期在24小时左右。2、组织标本中去势抵抗性前列腺癌细胞因低表达miR-146a,因此自噬水平较癌旁组织低,侧面提示1miR-146a能促进CRPC自噬水平。
【关键词】：去势抵抗性前列腺癌 miR-146a 自噬
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 缩略词9-10
• 前言10-12
• 文献综述12-15
• 第一部分 材料和方法15-32
• 第二部分 实验结果32-36
• 第三部分 讨论36-41
• 第四部分 结论41-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-47
• 作者简介47

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本文编号：557634