低氧与二甲双胍对涎腺腺样囊性癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-07-18 13:01

  本文关键词：低氧与二甲双胍对涎腺腺样囊性癌细胞生物学行为的影响

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【摘要】：目的:观察低氧与二甲双胍对涎腺腺样囊性癌细胞(SACC)生物学行为的影响并探讨其作用机制,为临床肿瘤的防治提供理论与实验依据。方法:1.SACC-83细胞在常氧(21%O2)和低氧(15%、10%、5%和1%O2)环境中培养8、24和48 h,CCK法检测细胞增殖;加入0、5、10、20和40 m M二甲双胍,分别在常氧和5%氧环境中培养48 h,同法比较细胞增殖能力的变化。2.加入0、20和40 m M二甲双胍,分别在常氧和5%氧环境中培养48 h,采用细胞划痕实验和Transwell小室方法,比较观察SACC-83细胞迁移、侵袭能力的变化。3.与以上相同的实验条件下,运用western blot、real-time PCR方法,比较观察SACC-83细胞HIF-1α、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白及m RNA表达水平的变化。结果:1.SACC-83细胞的增殖能力随氧浓度降低而减弱,随培养时间延长而减弱,随二甲双胍浓度增加而降低;低氧环境中20、40 m M二甲双胍组的细胞增殖均明显高于常氧(P0.05)各组。提示二甲双胍的增殖抑制效应在低氧环境下减弱。2.与常氧相比,SACC-83细胞在单纯低氧环境下的迁移能力减弱,而侵袭能力增高;相同氧环境中,细胞的迁移、侵袭能力随二甲双胍浓度增加而减弱(P0.01,P0.05,vs 0 m M);常氧环境中仅20 m M二甲双胍即可明显抑制细胞迁移、侵袭能力,而低氧环境中需40 m M二甲双胍才能抑制细胞迁移、侵袭能力(P0.01,vs 0 m M)。提示二甲双胍的抗迁移、侵袭作用在低氧环境下减弱。3.SACC-83细胞中HIF-1α、VEGF、MMP-2和MMP-9的蛋白及m RNA表达均随二甲双胍浓度的增加而降低(P0.01,vs 0 m M),但低氧各组的表达水平均明显高于常氧各组(P0.05),表明低氧可上调HIF-1α、VEGF、MMP-2和MMP-9的表达。结论:低氧可拮抗二甲双胍的抑瘤效应,增强SACC-83细胞的侵袭能力,其作用机制可能是通过调控HIF-1α、VEGF、MMP-2和MMP-9的表达来实现的。
【关键词】：低氧 二甲双胍 涎腺腺样囊性癌
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.87
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-13
• 1.1 微环境缺氧促进肿瘤增殖、侵袭和转移10-11
• 1.2 二甲双胍抑制肿瘤的生长、侵袭和转移的研究进展11-12
• 1.3 本课题的意义与设想12-13
• 第2章 材料与方法13-31
• 2.1 材料13-19
• 2.1.1 细胞株13
• 2.1.2 主要实验试剂13-15
• 2.1.3 主要实验仪器15-16
• 2.1.4 主要实验试剂配制方法16-19
• 2.2 研究方法及内容19-31
• 2.2.1 细胞复苏19
• 2.2.2 细胞传代培养19-20
• 2.2.3 细胞冻存20
• 2.2.4 细胞接种20-21
• 2.2.5 培养箱低氧环境控制措施21
• 2.2.6 低氧环境对 SACC-83 细胞增殖能力的影响21-22
• 2.2.7 低氧环境中二甲双胍对 SACC-83 细胞增殖能力的影响22
• 2.2.8 细胞划痕实验检测 SACC-83 细胞的迁移能力22-23
• 2.2.9 Transwell实验检测SACC-83 细胞的侵袭能力23
• 2.2.10 细胞蛋白提取、浓度测定与保存23-25
• 2.2.11 Western blot检测SACC-83 细胞株中HIF-1α、VEGF、MMP-2、MMP25-27
• 2.2.12 Real-time PCR检测SACC-83 细胞株中HIF-1α、VEGF、MMP-2、MMP-9的m RNA表达27-30
• 2.2.13 统计学分析30-31
• 第3章 实验结果31-45
• 3.1 不同氧环境对SACC-83 细胞增殖能力的影响31-32
• 3.2 低氧环境中二甲双胍对SACC-83 细胞增殖能力的影响32-33
• 3.3 低氧环境中二甲双胍对SACC-83 细胞迁移能力的影响33-34
• 3.4 低氧环境中二甲双胍对SACC-83 细胞侵袭能力的影响34-35
• 3.5 低氧环境中二甲双胍对SACC-83 细胞HIF-1α、VEGF、MMP-2 和MMP-9蛋白表达水平的影响35-39
• 3.6 低氧环境中二甲双胍对SACC-83 细胞HIF-1α、VEGF、MMP-2 和MMP-9m RNA表达水平的影响39-45
• 3.6.1 RNA纯度鉴定39
• 3.6.2 RNA完整性鉴定39-40
• 3.6.3 Real-time PCR测定GAPDH、HIF-1α、VEGF、MMP-2、MMP-9m RNA的溶解曲线40-41
• 3.6.4 Real-time PCR测定GAPDH、HIF-1α、VEGF、MMP-2 和MMP-9m RNA的扩增曲线41
• 3.6.5 Real-time PCR测定HIF-1α、VEGF、MMP-2 和MMP-9 m RNA的表达水平41-45
• 第4章 讨论45-49
• 4.1 低氧与二甲双胍对SACC-83 细胞增殖的影响45
• 4.2 低氧与二甲双胍对SACC-83 细胞迁移、侵袭能力的影响45-46
• 4.3 低氧与二甲双胍对肿瘤细胞生物学行为影响的可能机制46-49
• 第5章 结论49-50
• 致谢50-51
• 参考文献51-55
• 攻读学位期间的研究成果55-56
• 综述56-67
• 参考文献62-67

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