miR-124提高食管癌放射敏感性的机制研究

发布时间：2017-07-20 03:05

  本文关键词：miR-124提高食管癌放射敏感性的机制研究

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【摘要】：第一部分mi R-124在食管TE-1及Eca109中的表达情况及其对细胞增殖及迁移的影响目的:研究食管鳞癌细胞(TE-1及Eca109)中mi R-124的表达情况及其对细胞增殖及迁移的影响。方法:采用RT-PCR法检测人食管癌细胞系TE-1、Eca109及正常食管上皮细胞HEEC中mi R-124的表达;CCK-8法检测过表达mi R-124对细胞增殖能力的影响,细胞划痕实验检测过表达mi R-124对细胞迁移能力的影响,细胞周期试验检测过表达mi R-124对细胞周期的影响,分析mi R-124在食管鳞癌细胞增殖及迁移中的作用。结果:与Eca109细胞及TE-1细胞相比,正常食管黏膜细胞HEEC中mi R-124表达水平明显较高;mi R-124的过表达可以抑制Eca109及TE-1细胞的迁移及增殖,且使G1期细胞增多。结论:mi R-124在食管癌细胞中低表达,mi R-124可抑制食管癌细胞增殖及迁移能力,并诱导细胞阻滞在G1期。第二部分上调食管癌细胞系TE-1及Eac109中mi R-124的表达对其放射敏感性的影响目的:研究上调mi R-124的表达是否可提高食管癌细胞放射敏感性。方法:利用Lipofectamine TM 2000将mi R-124 mimics转染至食管鳞癌细胞TE-1及Eca109中,分别检测转染和未转染细胞经相同剂量放射线治疗后细胞凋亡情况,分析在食管癌细胞TE-1及Eca109中上调mi R-124表达对放射敏感性的影响。结果:CCK8实验证明过表达mi R-124可抑制放射后细胞增殖,细胞克隆形成实验、Annexin V/PI双染法流式细胞凋亡实验以及Hoechst 33258染色均证明过表达mi R-124可增加放射线处理后细胞凋亡,且TE-1细胞放射敏感性高于Eca109细胞。结论:上调miR-124的表达可增加放射线治疗后细胞凋亡,增加其放射敏感性。第三部分mi R-124靶向调控CDK4基因表达的研究目的:筛选出mi R-124的可能靶基因,并验证mi R-124对所预测靶基因的调控关系。方法:应用生物信息学手段(mi RNA数据库等)对mi R-124的可能靶基因进行预测,筛选mi R-124调控细胞阻滞于G1期的可能靶基因,经酶切构建含有预测靶基因3’-UTR的报告载体psi CHECK-CDK4,经过基因测序验证后,应用荧光素酶报告基因实验进一步验证CDK4是否为mi R-124的直接靶基因。最后,利用RT-PCR、Western Blot分别检测mi R-124对所预测出的靶基因m RNA及蛋白表达的影响。结果:利用生物信息学技术预测CDK4为mi R-124的靶基因;荧光素酶报告基因实验证明mi R-124可与靶基因CDK4 m RNA 3’-UTR有效结合;RT-PCR证明转染mi R-124 mimic的细胞内CDK4的m RNA表达水平降低,Western Blot检测转染mi R-124 mimic的细胞CDK4蛋白表达水平较未转染的低。结论:mi R-124可与靶基因CDK4 m RNA 3’-UTR有效结合从而起到调节CDK4表达的作用,上调mi R-124的表达可抑制CDK4的表达。CDK4是mi R-124的直接靶基因。
【关键词】：miR-124 食管癌细胞株 CDK4 放射敏感性
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-13
• 第一部分 miR-124在食管TE-1 及Eca109中的表达及其对细胞增殖及迁移的影响13-27
• 前言13
• 材料和方法13-21
• 结果21-25
• 讨论25-26
• 结论26-27
• 第二部分 上调食管癌细胞系TE-1 及Eac109中miR-124的表达对其放射敏感性的影响27-35
• 前言27
• 材料和方法27-30
• 结果30-32
• 讨论32-34
• 结论34-35
• 第三部分 miR-124靶向调控CDK4基因表达的研究35-49
• 前言35
• 材料和方法35-43
• 结果43-47
• 讨论47-48
• 结论48-49
• 参考文献49-51
• 致谢51-53
• 附录53-63
• 附录A 文献综述53-63
• 参考文献59-63
• 附录B 在读期间发表文章情况63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：565962