EGFR基因19外显子缺失突变检测方法的研究

发布时间：2017-07-26 11:39

  本文关键词：EGFR基因19外显子缺失突变检测方法的研究

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【摘要】：目的:利用PCR、酶切及蓝白斑筛选技术,通过野生型、突变型质粒混合模拟不同比例检测EGFR基因19外显子缺失突变,建立一种快速、灵敏、廉价的EGFR基因诊断技术。方法:根据EGFR基因19外显子del E746-A750和del L747 S752 ins S缺失突变,即15碱基和18碱基缺失突变为检测靶点,分别设计相关配对引物,构建野生型及突变型质粒模版;设计一组特异性PCR引物,并以EGFR野生型、突变型质粒为模板模拟实际标本中野生型与突变型基因比例,进行插入片段的PCR扩增;结合蓝白斑筛选技术原理,野生型阅读框架中因含有终止密码子TAA,菌落呈白色,缺失突变型因丢失特定的一段核酸片段而不含有终止密码子TAA,故菌落呈现蓝色,以此确定样品有无EGFR基因19外显子的缺失突变;通过限制性内切酶酶切野生型片段,可以减少白色菌落克隆数量,间接富集突变型DNA,提高检测效率。结果:EGFR基因野生型插入片段分子克隆的菌落为白色,突变型插入片段分子克隆的菌落为蓝色。通过模拟野生型、突变型质粒不同比例,实验得出在仅有万分之一突变模板浓度(野生模板:突变模板=10000:1)时,该体系仍能检测到突变基因的存在。结论:本实验方法在不同比例模板检测中具有较高的灵敏性和特异性,对肿瘤的早期诊断和肿瘤复发监控具有应用价值,有巨大的经济和社会效益。
【关键词】：EGFR基因 PCR 蓝白斑筛选 限制性内切酶
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-9
• 研究材料9-11
• 研究方法11-17
• 研究结果17-23
• 讨论23-25
• 结论25-26
• 参考文献26-28
• 综述28-35
• 参考文献32-35
• 致谢35-36

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本文编号：576240