供体来源树突状细胞诱导体外扩增Tregs对受体肿瘤免疫的影响

发布时间：2017-07-27 07:10

  本文关键词：供体来源树突状细胞诱导体外扩增Tregs对受体肿瘤免疫的影响

  更多相关文章： 调节性T细胞 成熟树突状细胞 肿瘤

【摘要】：目的研究过继输注体外扩增Tregs治疗是否抑制移植物受体的抗肿瘤免疫,以及体外扩增Tregs与供体来源成熟树突状细胞共培养是否能够诱导Tregs的抗原特异性。方法1.取C57BL/6 (H-2b)小鼠或BALB/c (H-2d)小鼠骨髓细胞,在重组鼠源性GM-CSF和IL-4诱导以及TNF-a刺激下分化为成熟树突状细胞。2.免疫磁珠法(MACS)从BALB/c或C57BL/6小鼠脾脏分选出CD4+CD25+Tregs,加入anti-CD3/CD28磁珠和高浓度重组鼠源性IL-2(1000U/ml),体外扩增14天。3.在给予低浓度重组鼠源性IL-2 (200U/ml)的条件下,体外扩增后CD4+CD25+ regs与成熟树突状细胞(C57BL/6小鼠CD4+CD25+ Tregs与BALB/c小鼠成熟树突状细胞或者BALB/c小鼠CD4+CD25+ Tregs与C57BL/6小鼠成熟树突状细胞)混合培养7天。4.流式细胞术检测成熟树突状细胞及Tregs纯度,混合淋巴细胞反应检测Tregs体外抑制功能。5.构建小鼠皮肤移植模型检测Tregs体内抑制功能。6.分别注射B16-F10(小鼠黑色素瘤细胞,H-2b)于C57BL/6和BALB/c小鼠,建立小鼠肿瘤模型。7.收集扩增后及诱导后Tregs分别过继输注于C57BL/6和BALB/c小鼠体内,24小时后注射B16-F10。8.14天后处死小鼠,观察肺部肿瘤结节并记数。结果1.扩增后及诱导后Tregs与新鲜分选Tregs相比,纯度和免疫抑制功能无明显下降。2.扩增后及诱导后Tregs能够显著延长同种异体皮肤移植物生存时间(14.5天Vs 9天,β0.05)。3.C57BL/6小鼠单独注射5×105B16-F10,14天后肺部肿瘤结节为93+12个,预先输注1×107体外扩增后Tregs,24小时后注射5×10。B16-F10,肺部肿瘤结节为355±15个,而预先输注1×107诱导后Tregs,24小时后注射5×105B16-F10,肺部肿瘤结节为195±13个,相比单独注射B16-F10,后两者肺部肿瘤结节明显增加(p0.05)。4.单独注射5×10B16-F10, BALB/c小鼠肺部肿瘤结节为9±-6个,预先输注1×107体外扩增后Tregs,24小时后注射5×105B16-F10,肺部肿瘤结节为124+4个,而预先输注1×107诱导后Tregs,24小时后注射5×105B16-F10,肺部肿瘤结节为297±-18个,与单独注射B16-F10相比,后两者肺部肿瘤结节明显增加(p0.05)。结论1.通过MACS分选,Tregs纯度能够达到95%以上。2.通过体外扩增,我们能够得到足量的具有免疫抑制功能的Tregs 。3.过继输注一定数量体外扩增后Tregs能够抑制机体的抗肿瘤免疫,引起MHC完全匹配(受体来源)或完全不匹配(供体来源)肿瘤的发生。4.体外扩增后Tregs与供体来源成熟树突状细胞混合培养能够诱导Tregs的抗原特异性。
【关键词】：调节性T细胞 成熟树突状细胞 肿瘤
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.3
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-14
• 1 材料与方法14-22
• 2 结果22-31
• 3 讨论31-34
• 全文总结34-35
• 参考文献35-39
• 文献综述39-49
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的论文50

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本文编号：580280