DACH1抑制舌鳞状细胞癌生长及转移的研究

发布时间：2017-07-30 03:18

  本文关键词：DACH1抑制舌鳞状细胞癌生长及转移的研究

  更多相关文章： DACH1蛋白 舌鳞状细胞癌 RT-PCR 免疫组织化学技术 DACH1 SCC-25细胞 增殖 转移 凋亡

【摘要】：目的探讨肿瘤抑制基因(Dachshund homolog1,DACH1)在人舌鳞状细胞癌(Tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中发挥的作用。方法收集2011年—2013年青岛大学附属医院51例TSCC住院患者的肿瘤标本。患者按照年龄、性别、肿瘤临床分期、组织类型、分化程度、有无淋巴结转移分类。所有患者术前均未行放疗、化疗及其他干预治疗,并同期行颈部淋巴结清扫术。免疫组织化学技术检测DACH1蛋白在TSCC及对应癌周正常组织中的表达,并结合相关临床病理参数进行综合分析。Real time RT-PCR及Western Blot方法检测9例新鲜舌鳞癌及癌周正常组织中DACH1表达情况。结果免疫组织化学结果表明,约70.6%(36/51)TSCC原发灶中低表达DACH1(P0.05);DACH1的低表达与肿瘤分化差,临床分期晚及淋巴结转移成正相关(P0.05)。Real time RT-PCR及Western Blot检测结果显示DACH1m RNA及蛋白质在TSCC表达均低于癌周正常组织(P0.01)。结论DACH1在TSCC中呈低表达,DACH1低表达与肿瘤分化差,临床分期晚及转移相关,提示DACH1可能成为TSCC抗肿瘤药物的治疗有效靶点。目的检测DACH1基因过表达对舌鳞癌SCC-25细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭转移的影响。方法Western Blot分别检测舌鳞癌细胞系CAL-27、Tca 8113及SCC-25中DACH1的表达。构建慢病毒过表达载体转染舌鳞癌细胞株SCC-25,筛选转染成功的细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组。用MTT、克隆生成实验检测DACH1过表达对细胞增殖的影响;Transwell小室及粘附实验检测DACH1过表达对细胞迁移、侵袭、转移能力的影响;流式细胞术检测DACH1过表达对细胞凋亡的作用。结果DACH1在SCC-25细胞中表达较CAL-27、Tca 8113细胞系显著降低(P0.05),过表达DACH1于SCC-25细胞可显著抑制其增殖活性及克隆形成能力,同时抑制癌细侵袭及转移,诱导SCC-25细胞凋亡,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论DACH1过表达可能与TSCC进展过程密切相关,其表达上调后可显著抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭转移能力,促进其凋亡,因此,DACH1过表达于TSCC可遏制其恶性进展,有望为TSCC的临床治疗提供新的途径。
【关键词】：DACH1蛋白 舌鳞状细胞癌 RT-PCR 免疫组织化学技术 DACH1 SCC-25细胞 增殖 转移 凋亡
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.86
【目录】：

• 第一部分 检测肿瘤抑制基因DACH1在人舌鳞状细胞癌中的表达2-20
• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-6
• 第1章 材料与方法6-13
• 1.1 实验材料6-7
• 1.1.1 主要试剂6-7
• 1.1.2 主要仪器及材料7
• 1.1.3 组织标本来源7
• 1.2 实验方法7-13
• 1.2.1 免疫组织化学7-8
• 1.2.2 结果判定标准8
• 1.2.3 Real time RT-PCR8-10
• 1.2.4 Western blot10-12
• 1.2.5 统计学方法12-13
• 第2章 结果13-16
• 2.1 DACH1蛋白在舌鳞状细胞癌及对应癌周正常组织中的表达13
• 2.2 DACH1蛋白表达与临床病理参数的关系13-14
• 2.3 DACH1m RNA及蛋白质在新鲜舌鳞癌和癌周正常组织中的表达14-16
• 第3章 讨论16-18
• 结论18-19
• 参考文献19-20
• 第二部分 DACH1基因过表达对SCC-25细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭转移的影响20-44
• 摘要20-21
• Abstract21-23
• 引言23-24
• 第1章 材料与方法24-31
• 1.1 实验材料24-26
• 1.1.1 细胞系24
• 1.1.2 载体24
• 1.1.3 引物序列24
• 1.1.4 主要试剂24-25
• 1.1.5 主要仪器及设备25-26
• 1.2 实验方法26-29
• 1.2.1 舌鳞状细胞癌细胞培养26
• 1.2.2 慢病毒载体的构建26
• 1.2.3 慢病毒载体稳定转染舌鳞癌细胞系的选择26
• 1.2.4 慢病毒载体转染效率的检测26-27
• 1.2.5 RT-PCR检测转染后舌鳞癌细胞株DACH1m RNA的表达27
• 1.2.6 Western blot检测转染后舌鳞癌细胞株DACH1蛋白质的表达27-28
• 1.2.7 检测DACH1基因过表达对舌鳞癌细胞增殖的影响28-29
• 1.2.8 流式细胞仪检测DACH1基因过表达对舌鳞癌细胞凋亡的影响29
• 1.2.9 Transwell小室检测DACH1基因过表达对舌鳞癌细胞迁移能力的影响29
• 1.3 黏附实验检测DACH1基因过表达对舌鳞癌细胞侵袭转移能力的影响29-31
• 1.3.1 统计学分析30-31
• 第2章 结果31-37
• 2.1 慢病毒载体稳定转染舌鳞癌细胞系的选择31-32
• 2.2 SCC-25 细胞中DACH1过表达效率的检测32-33
• 2.3 DACH1基因过表达对SCC-25 细胞增殖活性的影响33-35
• 2.3.1 DACH1基因过表达抑制SCC-25 细胞增殖活性33-34
• 2.3.2 DACH1基因过表达SCC-25 细胞克隆形成能力34-35
• 2.4 DACH1基因过表达诱导SCC-25 细胞凋亡35-36
• 2.5 DACH1基因过表达抑制SCC-25 细胞迁移36
• 2.6 DACH1基因过表达抑制SCC-25 细胞侵袭、转移36-37
• 第3章 讨论37-41
• 结论41-42
• 参考文献42-44
• 综述44-52
• 综述参考文献49-52
• 附录52-54
• 攻读论文期间取得的研究成果54-55
• 致谢55-56

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本文编号：592306