食管鳞癌高频扩增基因IGHMBP2的鉴定及其功能的初步研究

发布时间：2017-07-31 01:07

  本文关键词：食管鳞癌高频扩增基因IGHMBP2的鉴定及其功能的初步研究

  更多相关文章： IGHMBP2 食管鳞癌 表达 侵袭 迁移

【摘要】：目的:在我国食管鳞癌是常见的恶性肿瘤之一,食管鳞癌严重危及人类健康,其死亡率居于我国恶性肿瘤中的第四位。食管鳞癌预后较差,由于其易发生淋巴结转移,易累及如主动脉、气管、支气管和肺等的邻近器官,常导致治疗失败。因此当前的主要研究方向之一就是在寻找与食管鳞癌进展相关的基因,然后对其进行功能方面的初步研究。本文旨在观察IGHMBP2在食管鳞癌肿瘤组织中的扩增情况,以及该基因在细胞系中的扩增和蛋白表达情况;探讨敲降和正转IGHMBP2对细胞蛋白表达水平和侵袭迁移能力的影响,以及敲降IGHMBP2对侵袭迁移相关蛋白及凋亡相关蛋白表达水平的影响。方法:选取59例食管鳞癌标本和8个食管鳞癌细胞系作为研究对象。应用array-CGH技术检测IGHMBP2在食管鳞癌原发肿瘤组织的扩增情况,采用荧光原位杂交(FISH)和Western blot技术检测其在食管鳞癌细胞系中的扩增和蛋白表达水平;应用Transwell体外侵袭实验观察敲降IGHMBP2和正转pc DNA3.1-IGHMBP2质粒对食管鳞癌细胞系的侵袭和迁移能力的影响;MTS法检测敲降IGHMBP2对食管鳞癌细胞增殖能力的影响;Western blot技术检测敲降IGHMBP2对侵袭迁移相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平的影响。结果:发现IGHMBP2基因在食管鳞癌原发肿瘤组织中扩增且扩增频率为28.9%(17/59),在食管鳞癌细胞系KYSE30、KYSE180和KYSE510中存在扩增,在KYSE150中呈现增益,且相应的蛋白表达水平也较高;在KYSE30和KYSE150细胞系中敲降IGHMBP2后,细胞的蛋白表达水平和侵袭迁移能力均明显降低(P0.001),然后再正转pc DNA3.1-IGHMBP2质粒,两细胞系的蛋白表达水平回复,细胞系的侵袭迁移能力也得以恢复(P0.01);在COLO680N细胞系中转染IGHMBP2质粒后,其蛋白表达水平升高,细胞的侵袭迁移能力也相应升高(P0.01);敲降IGHMBP2在前两天对增殖几乎没有影响,因此排除了增殖对细胞侵袭迁移的影响;在敲降IGHMBP2后侵袭迁移相关蛋白E-cadherin的表达水平升高,而β-catenin、MMP、m TOR、ERK/p-ERK及GSK3β/p-GSK3β等侵袭迁移相关蛋白的表达水平未见明显变化,凋亡相关蛋白PARP1和Caspase3蛋白的表达水平也未发现明显变化。结论:IGHMBP2在食管鳞癌肿瘤组织中扩增,在食管鳞癌细胞系中扩增和高表达,该蛋白过表达使食管鳞癌细胞的侵袭和迁移能力增强,这可能是通过降低E-cadherin的表达水平而实现的。
【关键词】：IGHMBP2 食管鳞癌 表达 侵袭 迁移
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 缩略语表6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1.前言12-14
• 2.材料与方法14-31
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 细胞系及培养条件14-15
• 2.1.2 真核表达质粒15
• 2.1.3 主要仪器15-16
• 2.1.4 主要试剂及耗材16-17
• 2.1.5 试剂盒17
• 2.1.6 抗体17-18
• 2.1.7 SIRNA靶序列18
• 2.1.8 IGHMBP2 CDS克隆引物18
• 2.1.9 试剂的配制及使用18-19
• 2.2 方法19-31
• 2.2.1 细胞系总RNA提取19-20
• 2.2.2 逆转录20
• 2.2.3 PCR20-21
• 2.2.4 WESTERN BLOT实验21-23
• 2.2.5 细菌转化及质粒提取23-24
• 2.2.6 荧光原位杂交24-27
• 2.2.7 细胞培养27-28
• 2.2.8 转染SIRNA28-29
• 2.2.9 细胞迁移实验29-30
• 2.2.10 细胞侵袭实验30
• 2.2.11 MTS法测定细胞生长曲线30
• 2.2.12 统计方法30-31
• 3 结果31-40
• 3.1 IGHMBP2在食管鳞癌原发肿瘤中扩增31
• 3.2 IGHMBP2在食管鳞癌细胞系中扩增及其表达31-33
• 3.3 SIRNA敲降效果及PCDNA3.1-IGHMBP2质粒表达效果的验证结果33-34
• 3.4 敲降IGHMBP2对食管鳞癌细胞侵袭迁移能力的影响34-36
• 3.5 敲降IGHMBP2后正转表达质粒对食管鳞癌细胞侵袭迁移能力的影响36-38
• 3.6 敲降IGHMBP2对食管鳞癌细胞增殖能力的影响38
• 3.7 敲降IGHMBP2对侵袭迁移相关蛋白表达水平的影响38-40
• 3.8 敲降IGHMBP2对凋亡相关蛋白表达水平的影响40
• 4 讨论40-44
• 5 结论44
• 参考文献44-50
• 附录50-52
• 致谢52-53
• 文献综述53-61
• 参考文献58-61

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本文编号：596797