瘦素及其受体在人乳头状甲状腺癌K1细胞中的表达及其作用的研究

发布时间：2017-08-02 19:41

  本文关键词：瘦素及其受体在人乳头状甲状腺癌K1细胞中的表达及其作用的研究

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【摘要】：目的探讨不同浓度的瘦素对人乳头状甲状腺癌K1细胞的增殖、迁移和侵袭能力。应用O b R基因小分子干扰RNA(a small interfering RNA,si RNA)技术,si RNA沉默瘦素受体(O b R)基因后研究对人乳头状甲状腺癌K1细胞Ob R基因在m RNA水平、蛋白水平上的表达情况与O b R基因沉默后对人乳头状甲状腺癌K1细胞的增殖和侵袭的影响,为甲状腺癌的临床研究及药物治疗提供理论依据。方法1,分别用0 ng/ml(空白对照组)、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和125 ng/ml,5组不同浓度的瘦素处理人乳头状甲状腺癌K1细胞,MTT实验检测不同浓度瘦素处理K1细胞后细胞的增殖能力、划痕实验检测K1细胞迁移能力、Transwell侵袭实验检测K1细胞侵袭能力。2,使用带有FAM荧光标记的阴性对照si RNA优化转染条件。根据最优转染条件将O b R si RNA通过脂质载体转染法转染入K1细胞。实验设置空白对照组、阴性对照组和O b R si RNA基因沉默组。将K1细胞接种于6孔板中瞬时转染培养24小时和48小时后,实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)和免疫印迹技术(Western Blotting)分别在m RNA水平和蛋白水平检测Ob R si RNA是否有效抑制K1细胞内靶基因的表达;M TT实验研究Ob R基因沉默后K1细胞的增殖能力和细胞活性;Transwell侵袭实验检测O b R基因沉默后K1细胞的侵袭能力。结果1 MTT实验检测结果显示不同浓度的瘦素对K1细胞的增殖并没有影响(P0.05);不同浓度的瘦素处理K1细胞24小时后划痕实验迁移率分别为:40.2003%、47.3832%、59.9498%、68.7323%、79.3063%;48小时划痕实验迁移率分别为:49.3978%、74.192%、86.7326%、87.7952%、90.0051%。Transwell侵袭实验结果显示,穿出的细胞数有依次增多的趋势(P0.05)。2 si RNA瞬时转染后,Real-time PCR实验结果显示,沉默O b R基因在m RNA水平上表达降低;Western Blot实验结果显示,沉默Ob R基因蛋白水平上有靶向抑制作用;R eal-time PCR与Western Blot实验中Ob R si RNA基因沉默组O b R基因表达量与空白对照组和阴性对照组相比表达量下降;MTT实验结果显示:沉默O b R基因后对K1细胞的增殖没有影响(P0.05);Transwell侵袭实验结果显示:Ob R基因沉默后K1细胞侵袭能力下降,穿过膜的细胞数量减少。结论瘦素及其受体不影响人乳头状甲状腺癌K1细胞的增殖;K1细胞的迁移和侵袭能力表现出时间依赖性与浓度依赖性;R NAi技术沉默Ob R基因后在m RNA水平和蛋白水平上均起到靶向抑制作用;R NAi技术沉默Ob R基因后K1细胞的侵袭能力下降。
【关键词】：人乳头状甲状腺癌K1细胞 瘦素(Leptin) 瘦素受体(ObR) siRNA 基因沉默 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R736.1
【目录】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 主要符号表11-12
• 前言12-15
• 第一部分 瘦素对人乳头状甲状腺癌K1细胞功能的影响15-26
• 1 材料15-18
• 2 方法18-23
• 3 结果23-26
• 第二部分 沉默OBR基因后对人乳头状甲状腺癌K1细胞生物学行为的影响26-42
• 1 材料26-30
• 2 方法30-37
• 3 结果37-42
• 讨论42-45
• 结论45-46
• 参考文献46-49
• 综述49-57
• 参考文献55-57
• 在校期间发表的学术论文57
• 在校期间参加的项目57-58
• 致谢58

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本文编号：610948