PTEN及其假基因PTENP1在胃癌组织及细胞中的表达及临床意义

发布时间：2017-08-07 06:01

  本文关键词：PTEN及其假基因PTENP1在胃癌组织及细胞中的表达及临床意义

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【摘要】：目的:1.检测36对胃癌组织和相应癌旁正常组织中PTEN和PTENP1的表达水平,并分析PTEN和PTENP1表达水平之间的差异和相互关系;2.分析PTEN和PTENP1与患者临床病理特征的关系;3.构建质粒,采用慢病毒转染技术建立过表达PTENP1的胃癌细胞系,为深入研究PTEN及PTENP1在胃癌中的作用机制奠定实验基础。材料与方法:1.收集天津医科大学肿瘤医院2014年10月-2015年1月期间手术的36例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织标本(所有患者均为初治患者)。本课题的研究目的及方法已详尽告知患者,并通过天津医科大学伦理委员会审核。研究内容如下:(1)详尽统计和分析所有患者临床病理特征。(2)提取上述组织的RNA,通过Realtime-PCR检测PTEN和PTENP1的表达情况。(3)提取上述组织的总蛋白,通过western blot检测PTEN蛋白的表达情况。(4)分析胃癌组织中PTEN和PTENP1表达水平的相关性。(5)分析PTEN和PTENP1的表达水平与患者临床病理特征的关系。P值0.05即为差异具有统计学意义。所有数据均选用SPSS17.0软件进行统计分析。2.构建过表达PTENP1的慢病毒质粒,应用此慢病毒质粒和包装质粒,经转染试剂LipofectamineTM2000包装293T细胞,合成具有稳定过表达PTENP1基因的慢病毒颗粒,用这种慢病毒颗粒分别感染MGC-803和MKN-45细胞,构建稳定过表达PTENP1的细胞株模型。(2)利用Realtime-PCR检测筛选后细胞中PTENP1 m RNA的表达水平及其对PTEN的调控作用。实验结果:1.胃癌组织中PTEN和PTENP1的m RNA水平及PTEN的蛋白水平均显著低于癌旁正常胃黏膜组织;2.在胃癌组织中,PTEN和PTENP1的表达水平具有正相关性,相关系数为rs=0.7889;P0.05。3.PTEN和PTENP1的表达水平与患者性别、年龄、是否有肿瘤家族史、吸烟饮酒史、组织学分级、分化程度、是否远处转移、肿瘤位置等因素无显著相关性(P0.05);PTEN和PTENP1的表达与肿瘤大小(长径是否≥5cm)、淋巴结转移、侵犯深度和肿瘤TNM分期具有显著相关性。大肿瘤体积组(长径≥5cm)患者PTEN和PTENP1的表达水平显著低于小肿瘤体积组(长径5cm),P值分别为P=0.027,P=0.031;发生淋巴结转移组患者的PTEN和PTENP1的表达水平显著低于未发生淋巴结转移组,P值分别为P=0.018,P=0.032;侵犯深度越深,PTEN和PTENP1的表达水平越低,P值分别为P=0.008,P=0.001;TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期的患者PTEN和PTENP1的表达水平显着高于Ⅲ、Ⅳ期患者,P值分别为P=0.002,P=0.025。4.成功构建过表达PTENP1的质粒。慢病毒颗粒感染MGC-803和MKN-45细胞系,Realtime-PCR证实PTENP1的表达水平显著增高,并且可以使其同源基因PTEN的m RNA表达水平增高。结论:1.PTEN和PTENP1在胃癌组织中的表达水平具有正相关性;2.PTEN和PTENP1在胃癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织;胃癌组织中PTEN和PTENP1的表达与肿瘤体积大小(长径是否≥5cm)、是否发生淋巴结转移、肿瘤侵犯深度和TNM分期具有显著相关性。PTEN和PTENP1可能成为胃癌诊断和治疗的新靶点。3.在胃癌细胞系MGC-803和MKN-45中,假基因PTENP1对其同源基因PTEN在转录水平上具有调控作用,过表达PTENP1基因可以使PTEN基因的m RNA表达水平上调。
【关键词】：PTEN PTENP1 胃癌 慢病毒
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、PTEN和PTENP1在胃癌及癌旁组织中的表达和临床意义16-31
• 1.1 对象和方法16-23
• 1.1.1 实验对象16
• 1.1.2 实验仪器16-17
• 1.1.3 实验材料17-18
• 1.1.4 实验方法18-23
• 1.2 结果23-27
• 1.2.1 胃癌组织和癌旁组织中PTEN和PTENP1 mRNA的表达差异23-24
• 1.2.2 胃癌组织和癌旁正常组织中PTEN蛋白的表达差异24
• 1.2.3 PTEN和PTENP1 mRNA的表达水平与患者临床病理学资料之间的关系24-27
• 1.3 讨论27-30
• 1.4 小结30-31
• 二、胃癌细胞系中PTENP1对PTEN的调控作用的探索31-47
• 2.1 对象和方法31-42
• 2.1.1 实验对象31
• 2.1.2 实验仪器31
• 2.1.3 实验材料31-33
• 2.1.4 实验方法33-42
• 2.2 结果42-43
• 2.2.1 重组PTENP1质粒的构建成功42
• 2.2.2 稳定过表达PTENP1的胃癌MGC-803和MKN-45细胞株的建立42-43
• 2.2.3 PTNEP1过表达可以导致PTEN mRNA表达量升高43
• 2.3 讨论43-46
• 2.4 小结46-47
• 结论47-48
• 参考文献48-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 附录57-59
• 综述 胃癌中的PTEN基因与其假基因PTENPl的作用及相互影响59-70
• 综述参考文献66-70
• 致谢70-71
• 个人简历71

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本文编号：633070