CTP介导抑癌基因NPRL2对肾癌细胞生物学活性及Bax-Caspase3凋亡通路的影响

发布时间：2017-08-08 22:14

  本文关键词：CTP介导抑癌基因NPRL2对肾癌细胞生物学活性及Bax-Caspase3凋亡通路的影响

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【摘要】：目的:证实胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)介导抑癌基因NPRL2(nitrogen permease regulator-like 2)以CTP-NPRL2融合蛋白形式对人肾癌细胞株786-O的作用,检测其诱导的肾癌细胞凋亡及其对Bax-Caspase3凋亡通路的影响。方法:构建重组质粒pET28a-CTP-NPRL2并转染大肠杆菌DH5α,从而获得原核表达体系用于CTP-NPRL2融合蛋白的表达和提取;Western blot验证CTP-NPRL2蛋白的表达;将CTP-NPRL2蛋白和肾癌786-O细胞共培养,采用免疫荧光染色和倒置荧光显微镜检测CTP-NPRL2蛋白在肾癌细胞786-O的亚细胞定位情况;MTT法检测786-O细胞增殖的情况;流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡情况;qRT-PCR、Western blot检测786-O细胞中Bax和Caspase-3在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果:(1)质粒测序结果显示成功构建所需的原核表达载体;(2)Western blot结果显示CTP-NPRL2融合蛋白在原核表达载体中有表达;(3)倒置荧光显微镜结果提示CTP-NPRL2蛋白导入786-O细胞后定位于胞浆;(4)MTT发现CTP-NPRL2组细胞增殖较NPRL2组及空白对照组受到明显的抑制(P0.05);(5)流式细胞分析显示,相对于空白对照组和NPRL2组,CTP-NPRL2组的凋亡率显著增高且处于G0/G1期细胞明显增多(P0.05)。(6)qRT-PCR和Western blot结果提示,与空白对照组和NPRL2组比较,CTP-NPRL2组Bax和Caspase-3在mRNA和蛋白质水平的表达均明显上调(P0.05)。结论:CTP介导抑癌基因NPRL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式导入肾癌786-O细胞中并对其有明显的抑制作用,可能通过影响Bax-Caspase3凋亡通路的活性,抑制786-O细胞的增殖,并诱导其凋亡将细胞周期阻滞于G0/G1期,从而发挥抑癌作用。
【关键词】：CTP-NPRL2融合蛋白 肾细胞癌 Bax-Caspase3凋亡通路
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-11
• 1 材料与方法11-24
• 2 结果24-32
• 3 讨论32-34
• 结论34-35
• 参考文献35-37
• 文献综述:转移性肾癌治疗的研究进展37-49
• 参考文献42-49
• 致谢49-50
• 硕士期间发表的论文50

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本文编号：642277