人源性噬菌体展示单链抗体库的构建及抗IGF-1/IGF-2单链抗体的筛选
发布时间：2021-12-31 16:53
背景胰岛素样生长因子1（Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1）和IGF-2在许多肿瘤中表达异常,导致病人预后不良,是分子靶向药物开发的理想靶标。单链抗体（Single-chain Antibody,scFv）是把单抗的重链可变区和轻链可变区通过一个柔性小肽连接而成,具有分子量小、穿透力强、免疫原性低、易于构建等优点。噬菌体展示技术（Phage Display Technology）是把抗体DNA片段插入噬菌体外壳蛋白基因中,抗体与外壳蛋白以融合蛋白形式表达在噬菌体表面,采用特定抗原对该噬菌体抗体库进行几轮筛选后即可获得针对特定抗原的单链抗体。本研究首先构建了一个人源性、大容量噬菌体展示单链抗体库,采用IGF-1和IGF-2蛋白作为抗原对其进行了筛选,获得了一种全新的抗IGF-1/IGF-2单链抗体。目的本研究通过噬菌体展示技术构建了大容量的全人源噬菌体展示单链抗体库,从中筛选出一种与IGF-1和IGF-2具有高度亲和力而与胰岛素亲和力相对较低的单链抗体,为下一步研究其体内外抗肿瘤活性提供必要的基础,并且为开发作用于IGF信号系统的靶向药物进行新的探索。方...
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
部分外周血淋巴细胞样本中提取的总RNA
413实验结果3.150例患者/健康人外周血淋巴细胞总RNA的提取如图1所示，提取的总RNA中28S和18S条带清晰可见，无降解。紫外分光光度计测定其浓度和纯度,OD260/OD280均在1.92左右，样品的浓度和纯度较好，可作为模板进行后续的实验。图1部分外周血淋巴细胞样本中提取的总RNA3.2PCR扩增抗体轻链可变区基因和重链可变区基因以外周血淋巴细胞总RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增出抗体的重链可变区基因（VH）和轻链可变区基因（VL），扩增结果如图2和图3所示。图2单链抗体重链可变区片段的RT-PCR结果。泳道1：DNAMarker；泳道2：空白；泳道3-10：重链可变区PCR扩增条带。
42图3单链抗体轻链可变区基因片段的RT-PCR结果。泳道1：DNAMarker；泳道2：空白；泳道3-6：抗体轻链kappa链PCR扩增条带；泳道7-10：抗体轻链lamda链PCR扩增条带。3.3SOE-PCR扩增scFv基因采用SOE-PCR技术将VH基因和VL基因（包括kappa链和lamda链）通过(G4S)3linker进行连接得到scFv基因（如图4、图5所示），即VH-linker-VL，并加入SfiI和NotI酶切位点。图4单链抗体scFv（kappa链）SOE-PCR扩增结果。泳道1：DNAMarker；泳道2-13：单链抗体scFv（kappa链）SOE-PCR扩增条带。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Improvement in affinity and thermostability of a fully human antibody against interleukin-17A by yeast-display technology and CDR grafting[J]. Wei Sun,Zhaona Yang,Heng Lin,Ming Liu,Chenxi Zhao,Xueying Hou,Zhuowei Hu,Bing Cuin. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)
[2]靶向表皮生长因子受体的肿瘤生物治疗方法研究进展[J]. 廖刚,王子卫. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2009(01)
[3]基因工程抗体的研究进展及临床应用[J]. 程露阳,郭亚春,董晓彤. 承德医学院学报. 2005(02)
[4]单克隆抗体及基因工程抗体在医学诊断上的应用[J]. 许慧,倪安平. 中华检验医学杂志. 2005(06)
[5]肿瘤靶向治疗[J]. 刘海峰. 第三军医大学学报. 2003(16)
本文编号：3560627
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
部分外周血淋巴细胞样本中提取的总RNA
413实验结果3.150例患者/健康人外周血淋巴细胞总RNA的提取如图1所示，提取的总RNA中28S和18S条带清晰可见，无降解。紫外分光光度计测定其浓度和纯度,OD260/OD280均在1.92左右，样品的浓度和纯度较好，可作为模板进行后续的实验。图1部分外周血淋巴细胞样本中提取的总RNA3.2PCR扩增抗体轻链可变区基因和重链可变区基因以外周血淋巴细胞总RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增出抗体的重链可变区基因（VH）和轻链可变区基因（VL），扩增结果如图2和图3所示。图2单链抗体重链可变区片段的RT-PCR结果。泳道1：DNAMarker；泳道2：空白；泳道3-10：重链可变区PCR扩增条带。
42图3单链抗体轻链可变区基因片段的RT-PCR结果。泳道1：DNAMarker；泳道2：空白；泳道3-6：抗体轻链kappa链PCR扩增条带；泳道7-10：抗体轻链lamda链PCR扩增条带。3.3SOE-PCR扩增scFv基因采用SOE-PCR技术将VH基因和VL基因（包括kappa链和lamda链）通过(G4S)3linker进行连接得到scFv基因（如图4、图5所示），即VH-linker-VL，并加入SfiI和NotI酶切位点。图4单链抗体scFv（kappa链）SOE-PCR扩增结果。泳道1：DNAMarker；泳道2-13：单链抗体scFv（kappa链）SOE-PCR扩增条带。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Improvement in affinity and thermostability of a fully human antibody against interleukin-17A by yeast-display technology and CDR grafting[J]. Wei Sun,Zhaona Yang,Heng Lin,Ming Liu,Chenxi Zhao,Xueying Hou,Zhuowei Hu,Bing Cuin. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)
[2]靶向表皮生长因子受体的肿瘤生物治疗方法研究进展[J]. 廖刚,王子卫. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2009(01)
[3]基因工程抗体的研究进展及临床应用[J]. 程露阳,郭亚春,董晓彤. 承德医学院学报. 2005(02)
[4]单克隆抗体及基因工程抗体在医学诊断上的应用[J]. 许慧,倪安平. 中华检验医学杂志. 2005(06)
[5]肿瘤靶向治疗[J]. 刘海峰. 第三军医大学学报. 2003(16)
本文编号：3560627
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