《2005植物分子育种国际学术研讨会论文集》2005年

发布时间：2016-09-04 12:17

  本文关键词：外源脱水应答转录因子DREB基因在转基因小麦中的诱导型表达与抗干旱生理效果研究(英文)，由笔耕文化传播整理发布。

《2005植物分子育种国际学术研讨会论文集》2005年

病原物诱导表达的Rs-AFP2基因转化辣椒研究

朱昌叁  罗齐军  胡木林  袁红旭  曾富华  

【摘要】：辣椒(Capsicum annuum L.)属于茄科,是一种重要的蔬菜作物和调料品,也可以作为园艺观赏植物。但目前的栽培品种大多易受真菌、细菌、病毒和线虫类的侵染而引起疫病、青枯病、斑叶病等多种病害,生产上的损失严重。随着植物基因工程技术的发展和成熟,人们已越来越多地应用该项技术来进行蔬菜作物抗病品种的选育,包括番茄、马铃薯等的转基因研究日益深入,成功的例子也日益增多。萝卜抗真菌蛋白Rs-AFPs 为萝卜种子中富含半胱氨酸残基的蛋白,可分为Rs-AFP1和Rs-AFP2两类,具有较强的耐酸碱性和热稳定性。这类蛋白通过引起菌丝过度分枝或抑制菌丝顶端生长而表现出有效的抗真菌活性。已有人将该蛋白基因置于组成型启动子或强启动子控制之下进行超量表达,在烟草、小麦等作物的抗真菌病基因工程中取得了较好的效果。不足之处在于,组成型启动子或强启动子控制下的Rs-AFP 基因在转化植物体内的高水平表达,对植物本身而言是不经济的,会在相当程度上降低作物的产量,对植物的生长也有不利影响,如导致畸形或死亡;在生态环境良好、无病虫害的生长条件下,外源基因的高水平表达是完全没有必要的。我们将Rs-AFP2基因置于马铃薯中克隆到的,具有很好的受病原真菌诱导的启动子片段prp1-1控制之下,通过农杆菌介导法转化辣椒,以期获得受病原真菌诱导表达的转化植株。已取得初步结果:辣椒的遗传转化以子叶为外植体,在分化培养基上预培养2～3d,叶柄切口处略有膨大时,用OD_(600)值为0.2～0.5的根癌农杆菌浸染7～8min,外植体与农杆菌在280C 的暗处共培养2～3d,经选择培养获得抗性芽,分化率为55%,PCR 检测目的基因已经转入辣椒体内。诱导分化培养基:MS 基本+6-BA 4.0mg/L(单位下同)+IAA0.5+AgNO_35共培养培养基:MS 基本+6-BA 4.0+IAA 0.5+AgNO_35选择分化培养基:MS 基本+6-BA 4.0+IAA 0.5+AgNO_35+Kan 20+Cef 300继代培养基:MS 基本IAA 0.5+AgNO~33+Cef300伸长培养基:MS 基本+6-BA 2.0+IAA 0.2+AgNO_32+GA3 0.5选择生根培养基:1/2 MS 基本+IAA 0.5+Kan 20以上培养基均加入3%蔗糖、0.8%琼脂。pH5.8～5.9,培养室温度26±2℃。光照时间10h/d,光照强度2000～2500Lux。在辣椒的遗传转化体系建立过程中,再生芽的伸长困难往往会导致实验失败,我们通过添加辣椒幼苗提取液(4～5ml/L),较好地解决了该难题;配合添加AgNO_3则有助于防止褐化现象的出现。在农杆菌侵染辣椒子叶外植体时添加了100μmol 的乙酰丁香酮有助于提高转化效率。

【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：S641.3
【正文快照】：

病原物诱导表达的Rs-AFP2基因转化辣椒研究@朱昌叁$广东省湛江师范学院自然科学与技术研究中心!湛江,524048广东省广东海洋大学农业生物技术研究所,湛江,524088 @罗齐军$广东省湛江师范学院自然科学与技术研究中心!湛江,524048 @胡木林$广东省湛江师范学院自然科学与技术

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