RNA干扰MEX3A基因表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡影响的实验研究

发布时间：2022-12-04 16:52

　　目的:MEX3A基因是一种新发现的肿瘤相关因子,其与膀胱癌的关系尚未明确。本研究的目的在于通过慢病毒介导的RNA干扰技术,探讨抑制MEX3A基因表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡功能的影响。研究方法:1.培养5637和T24两种膀胱癌细胞株,实时定量PCR检测MEX3A基因在两种细胞株中的表达量,选取表达量高者进行后续实验。2.参照基本设计原则,设计、选择合适的RNA干扰序列。3.合成含干扰序列的双链DNA,随后连接酶作用后的慢病毒载体,再将产物转入感受态大肠杆菌细胞,经聚合酶链式反应鉴并测序验证后,进行质粒抽提应用。4.鉴定及测序合格后与包装载体共转染293T细胞产生慢病毒颗粒;病毒滴度测定后转染经步骤一选择的细胞株（5637和T24二选一）,实验组转染MEX3A-shRNA慢病毒,对照组转染阴性对照慢病毒,经抗生素筛选建立稳定表达siRNA的细胞株。5.收集实验组和对照组细胞并提取总RNA,反转录后经实时定量PCR检测MEX3A基因敲减效率。6.慢病毒转染三天后,将实验组和对照组细胞分别接种于96孔板连续培养5天,每天使用全视野细胞扫描分析仪进行细胞计数并拍照。7.慢病毒转染五天后,分别收... 

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 主要试剂和仪器
    2.2 MEX3A-shRNA慢病毒载体的构建
    2.3 慢病毒载体的包装及滴度测定
    2.4 MEX3A基因在5637细胞株和T24细胞株的表达
    2.5 慢病毒感染及筛选稳定表达MEX3A-shRNA的细胞株
    2.6 Real-TimePCR检测MEX3A基因敲减效率
    2.7 细胞增殖检测
    2.8 细胞凋亡检测
    2.9 数据统计
3 结果
    3.1 MEX3A-shRNA慢病毒载体的鉴定及测序
    3.2 慢病毒载体的包装及滴度测定
    3.3 MEX3A基因在膀胱癌细胞的表达
    3.4 慢病毒转染5637细胞株及MEX3A基因的敲减效率
    3.5 细胞增殖检测结果
    3.6 细胞凋亡检测结果
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]腺性膀胱炎及膀胱癌中livin和caspase-9的表达[J]. 丁德鑫,陈辉,王志,杨巍,乔忠杰.  现代生物医学进展. 2016(06)
[2]MTA-1及PCNA在腺性膀胱炎中的表达及临床意义[J]. 王磊,王炜,王照,尹海军,徐学军,张传光,张爱民,高景宇.  中国现代医学杂志. 2014(19)
[3]慢病毒载体及其介导的RNA干扰在基因治疗中的应用研究[J]. 赵铁军,倪伟海,郑有芳,郭一孚,蒋欢乐,徐怡.  浙江师范大学学报(自然科学版). 2014(02)
[4]中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析[J]. 韩苏军,张思维,陈万青,李长岭.  癌症进展. 2013(01)
[5]MAPK/ERK1与STAT3在脂多糖诱导的腺性膀胱炎动物模型中的表达[J]. 黄瑛,柳达,姜罗,温昱,石玉秀.  解剖学报. 2012 (06)
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[9]端粒酶催化亚基在腺性膀胱炎中表达意义的研究[J]. 蒋利君,韦晓谋,沈思,谢广静.  检验医学与临床. 2009(02)
[10]SD大鼠腺性膀胱炎动物模型的建立[J]. 易憬,熊飞,苏良平,李庭庭,陈登,章慧平,杨兵,张盛龙,张宝珍,刘长.  临床外科杂志. 2008(08)

博士论文
[1]膀胱移行细胞癌Wnt信号通路抑制因子1基因启动子甲基化状态的基础与临床研究[D]. 傅斌.华中科技大学 2007
[2]STAT3信号通路在膀胱肿瘤发生发展中的作用[D]. 姚林方.华中科技大学 2006



本文编号：3708639