Rab39b敲除小鼠的构建与基因表达分析研究

发布时间：2024-02-15 11:39

　　背景及目的:Rab家族蛋白在调控囊泡运输过程中发挥着重要作用,其中一些Rab蛋白的突变被发现会导致疾病的发生。目前已经鉴定出60多种人类Rab家族蛋白,但是其中很多Rab蛋白的生理功能尚不清楚。RAB39B作为Rab家族的一员,在神经元中特异性表达。虽然有细胞研究提示RAB39B在神经元膜蛋白转运过程中发挥作用,并参与神经突触的形成和维持,而且RAB39B可能也参与了自噬。但是现在关于RAB39B的功能,特别是在动物整体水平的功能还不清楚。最近的研究发现发生在RAB39B编码基因上的突变与X染色体相关的智力障碍、帕金森病、自闭症等有密切相关,但是相关机制目前还不明瞭。因此迫切需要揭示RAB39B的生理和病理功能,为疾病的发病机制研究和治疗提供新的依据。方法及结果:在本研究中,我们应用TALEN技术构建了Rab3 b基因敲除的小鼠,并证实了该小鼠中没有RAB39B蛋白的表达。初步观察发现Rab39b基因敲除的小鼠能够正常出生,并在外观上无明显缺陷。我们进一步应用RNA-seq研究了Rab3 b基因缺失对于大脑中其他基因表达的影响,结果鉴定出30个显著上调的基因和31个显著下调的基因。这些...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．?１?Ｒａｂ蛋白－ＧＴＰ酶循环??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｒａｂ?ｐｒｏｔｅｉｎ－ＧＴＰａｓｅ?ｃｙｃｌｅｓ??

开关机制的主要驱动力。在执行完功能之后，Ｒａｂ蛋白被ＧＤＰ解离抑制因子??（Ｒａｂ?ＧＤＰ?ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，?ＲａｂＧＤＩ）从膜上解离下来，在细胞质中停留至??下一次使用。这一过程称为ＧＤＩ循环（图１．１）?［３］。??Ｒａｂ＃??「?Ｔ??Ｒａｂ?....

图１．３自闭症遗传因素研究的历史??

发现自闭症在同卵双生子的发生明显高于异卵双生子而证明的。近年来??随着基因组研究和二代测序等先进技术在大规模人群中的应用，现在己经在??１０－２５％的病人中发现了超过１００个与自闭症相关的易感基因（图１．３）?［６２’６４］。??１４％?Ｈｕｍａｎ?Ｇｅｎｏｍｅ?ＮＲＸＮａ／?＾....

图３．?１小鼠与人ＲＡＢ３９Ｂ蛋白的序列比对??

ＲＡＢ３９Ｂ蛋白的相似度。小鼠和人源的ＲＡＢ３９Ｂ蛋白均带有２１３个氨基酸。序??列比较显示它们之间极度保守，只在第２０５位有所差异：人ＲＡＢ３９Ｂ中为缬氨??酸，小鼠ＲＡＢ３９Ｂ中为异亮氨酸（

图３．２你於处基因敲除小鼠的构建策略??

的第１个外显子区域，诱导突变。所得到的ＫＯ小鼠缺失了“ＧＴ”两个碱基（红色标记）。）??通过显微注射，我们得到了基因敲除小鼠。该小鼠缺失了?外蛋白编码区??的第１０６－１０７位的“ＧＴ”两个碱基（图３．２Ｂ），导致移码突变：ＲＡＢ３９Ｂ蛋白翻译??从第３６位开始发生错乱并早期终止....

本文编号：3899682