蒙古沙冬青脂肪酸去饱和酶基因AmFAD2s的克隆与功能分析

发布时间：2024-03-01 03:23

　　植物细胞膜脂的不饱和度主要由脂肪酸去饱和酶(Fatty acid desaturases,FADs)决定,它们与植物抵抗低温和高盐等逆境胁迫密切相关。沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)是中亚荒漠区唯一的常绿旱生阔叶植物,具有很强的耐寒、耐旱和耐盐碱等耐逆性能。本研究从蒙古沙冬青(本文统称为沙冬青)中克隆到两个油酸去饱和酶基因AmFAD2-1和AmFAD2-2,并对其编码蛋白的结构特征、在非生物胁迫下的表达变化及其在抵抗逆境胁迫中的功能进行了分析,获得如下主要研究结果:(1)利用RT-PCR和PCR方法扩增到AmFAD2-1和AmFAD2-2的编码区cDNA和gDNA片段。二者编码区cDNA和gDNA的长度分别均为1149和1152 bp,在gDNA编码区内均无内含子。(2)AmFAD2-1和AmFAD2-2的编码蛋白分别由382和383个氨基酸残基组成,二者都含有FAD家族酶活性所必须的保守组氨酸簇HXXXH、HXXHH和HXXHH,在蛋白的C端区域均含有一个内质网定位信号(YNNKL)。(3)利用RT-qPCR分析表明,AmFAD2-1和AmFAD2-2不同...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１植物中不饱和脂肪酸的合成途径Ｍ??Ｆｉｇ．ｌ?Ｔｈｅ?ｐａｔｈｗａｙ?ｓｃｈｅｍｅ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｏｆ?ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ?ｆａｔｔｙ?ａｃｉｄｓ?ｉｎ?ｐｌａｎｔｓ??

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图２?ＦＡＤ２的拓扑结构模式图［５１］??Ｆｉｇ．２?Ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ｔｏｐｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＦＡＤ２??

７］。ＦＡＤ２分子的Ｎ端第一个疏??水跨膜区作为其Ｎ端信号肽，可被信号识别颗粒ＳＲＰ?（ｓｉｇｎａｌ?ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ?ｐａｒｔｉｃｌｅ）??识别与结合，然后在ＳＲＰ引导下到达内质网膜并通过Ｎ端信号肽插入内质网膜中，??其翻译完成的蛋白分子的Ｎ端位于内质网膜的胞质一侧［４８....

图４沙冬青ＲＮＡ检测图谱（部分样品）??Ｆｉｇ．４?Ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＲＮＡｓ?ｆｒｏｍ?Ａ．?ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｓ?（ｐａｒｔｉａｌ?ｓａｍｐｌｅｓ）??

＾?蒙古沙冬青脂肪酸去饱和酶基因的克隆与功能分析???３结果与分析??３．１沙冬青总ＲＮＡ的提取与检测??为了进行基因克隆和表达分析，提取了沙冬青各器官样品中的ＲＮＡ并进行纯??化，将残留的ｇＤＮＡ去除。取纯化后的ＲＮＡ样品进行电泳检测，结果如图４所示。??所提ＲＮＡ样品的２８Ｓ....

图５?基因扩增和菌落ＰＣＲ检测图谱??Ｆｉｇ．?５?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｃｏｌｏｎｙ?ＰＣＲ?ｐａｔｔｅｒｎｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＡｍＦＡＤ２－ｌ?ｇｅｎｅ??

分样品）??Ｆｉｇ．４?Ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＲＮＡｓ?ｆｒｏｍ?Ａ．?ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｓ?（ｐａｒｔｉａｌ?ｓａｍｐｌｅｓ）??３．２?基因的克隆与功能分析??３．２．１?编码区克隆与内含子分析??本实验室在前期通过转录组测序从沙冬青中获得２个的ｃＤＮＡ序列....

本文编号：3915361