表达禽腺病毒Fiber2基因重组新城疫病毒的拯救及免疫效果评价

发布时间：2024-03-25 21:30

　　自2015年以来,国内鸡群因禽腺病毒(Fowl adenoviruses,FAdV)感染引起的鸡肝炎-心包积液综合征(Hepatitis and Hydropericardium Syndrome,HHS)的病例呈逐年上升趋势。HHS主要多发于3～5周龄肉鸡,偶尔在10～20周龄蛋鸡中出现,给国内养禽业造成了严重的经济损失。流行病学调查显示,国内鸡群中FAdV的流行毒株主要是高致病性血清4型禽腺病毒(FAdV-4)。国外市场虽然已有部分商品化的FAdV灭活疫苗和弱毒活疫苗,但价格昂贵,难以在国内推广。目前,国内己有多项与FAdV-4相关的疫苗专利申请成功,包括各种灭活苗、基因工程亚单位疫苗和DNA疫苗,但尚没有针对FAdV-4的商品化疫苗。本研究首先通过反向遗传学操作以改造后致弱的基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)毒株(MG7)为载体(其F蛋白裂解位点从原碱基序列突变为LaSota疫苗株F蛋白的裂解位点),构建表达FAdV-4 Fiber2抗原基因的重组质粒并进行病毒拯救。接着通过检测鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄SPF雏鸡颅内接种致病指数(ICPI)和6周龄SPF鸡静脉接种致病指数(I...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２的构建示意图??Ｆｉｇ．?１－２?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２??

１．２．２?ｒＮＤＶ－Ｆｉｂｅｒ２的生物学特性研究??１．２．２．１病毒拯救及鉴定??预先在６孔细胞板中铺好ＢＨＫ－２１细胞，在其长至约８０?％单层时，弃去培养液，??用Ｏｐｔｉ－ＤＭＥＭ洗涤３次后，再加入表达Ｔ７?ＲＮＡ聚合酶的ＶＶＴ７重组痘病毒??（０．０１ＭＯＩ），置于３７....

图２－１?ｆ７＆／＊２基因ＰＣＲ扩增结果??Ｆｉｇ．?２－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｆｉｂｅｒ２??Ｍ：?ＤＬ２０００ＤＮＡ分子标记；１：阴性对照；２：?Ｆ／＆ｒ２基因扩增产物??

２结果与分析??２．１重组病毒ｒＮＤＶ－Ｆｉｂｅｒ２的构建及拯救??２．１．１?Ｆ／６ｅｒ２目的基因的扩增??以ｐＲＫ－Ｆｉｂｅｒ２质粒为模板，通过特异性的ＰＣＲ引物扩增到大小约为１４４０?ｂｐ的??特异性条带，与预期大小相符合（见图２－１）。??Ｍ?１?２??：０００ｂｐ＾＾Ｈ....

图２－３拯救病毒的血凝试验??Ｆｉｇ．?２－３?ＩＩＡ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｒＮＤＶ－Ｆｉｂｅｒ２??

１?２?Ｍ???１５０００ｂｐ??７５００ｂ?ｐ??ＳＯＯＯｂｐ??２５００ｂｐ??ｌＯＯＯｂｐ??２５０ｂｐ??图２－２?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２酶切验证鉴定结果??Ｆｉｇ．?２－２?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂ....

图２－２?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２酶切验证鉴定结果??Ｆｉｇ．?２－２?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２??

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本文编号：3938869