CP基因在果蝇中的功能研究

发布时间：2024-04-11 18:16

　　卵壳蛋白基因(Chorion protein,CP)是构建卵壳的重要基因,卵壳蛋白基因家族编码组成的卵壳蛋白占果蝇卵壳干重的95%以上。卵壳功能极为重要,它包裹在卵的表面保护卵免受外界环境的胁迫、进行必要的生存物质交换(如水分、气体、营养等)以及精子与卵结合通道等重要的生理功能。卵壳的行成发生在卵发育的14个阶段的末端,由CP基因控制表达的mRNA的形成或者消失来控制相应卵壳蛋白的表达。整个过程十分复杂,具有严格的时间、空间特异性。本文在首先FlyBase内筛选出卵壳蛋白相关基因,构建CP基因UAS-RNAi/Gal4杂交体系进行基因干扰(RNA interference,RNAi),通过统计分析各杂交株系的产卵能力以及卵孵化能力筛选出影响较为显著的杂交株系,并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确认其基因表达是否成功。然后拍摄观察CP基因RNAi卵表面微结构及形态、卵巢形态及卵巢小管发育状况,并电泳分离卵巢总蛋白、卵总蛋白,对比CP基因RNAi株系与亲本之间的蛋白表达差异。最后对所筛选出孵化率低于50%高于20%的CP基因RNAi株系的化蛹、羽化、寿命等发育过程进行探究。具体结果...

【文章页数】：110 页

【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
1 绪论
    1.1 果蝇简介、果蝇卵发育过程及卵壳的形成
        1.1.1 果蝇简介
        1.1.2 果蝇卵发育过程
        1.1.3 果蝇卵壳的形成
    1.2 昆虫卵壳基因、蛋白、结构及构建过程概述
        1.2.1 昆虫卵壳基因分布位置
        1.2.2 昆虫卵壳蛋白及微量元素组成
        1.2.3 昆虫卵壳的形态及功能
        1.2.4 昆虫卵壳构建过程
        1.2.5 昆虫卵畸形突变的研究
        1.2.6 昆虫卵孵化过程
    1.3 课题研究内容及意义
    1.4 课题来源与内容安排
2 CP基因RNAi后代的获取
    2.1 实验材料与仪器设备
        2.1.1 供试果蝇
        2.1.2 实验仪器及药品
        2.1.3 培养基的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 UAS-RNAi/Gal4 杂交后代的获取
        2.2.2 果蝇产卵能力实验
        2.2.3 果蝇卵孵化能力实验
        2.2.4 UAS-RNAi与 Gal4 杂交株系基因表达检测(Trizol法)
    2.3 实验数据处理
    2.4 实验结果与分析
        2.4.1 CP基因RNAi后代产卵能力分析
        2.4.2 CP基因RNAi后代孵化能力
        2.4.3 Gal4 品系与UAS-RNAi品系杂交后代基因表达检测
    2.5 讨论
3 CP基因对卵影响
    3.1 实验材料与仪器设备
        3.1.1 供试果蝇
        3.1.2 实验仪器及药品
    3.2 实验方法
        3.2.1 果蝇卵形态拍摄
        3.2.2 果蝇卵表面微观结构拍摄
    3.3 实验数据处理
    3.4 实验结果与分析
        3.4.1 CP基因对卵形态的影响′
        3.4.2 CP基因对卵表面微结构的影响
    3.5 讨论
4 CP基因对果蝇卵巢的影响
    4.1 实验试剂、材料与设备
        4.1.1 供试果蝇
    4.2 实验方法
        4.2.1 果蝇卵巢形态拍摄
        4.2.2 果蝇卵巢DAPI染色拍摄
        4.2.3 果蝇卵巢小管统计
    4.3 实验数据处理
    4.4 实验结果与分析
        4.4.1 CP基因对果蝇卵巢自然形态的影响
        4.4.2 CP基因对果蝇卵巢发育的影响
        4.4.3 CP基因对果蝇卵巢核酸损伤及卵巢小管的影响
    4.5 讨论
5 CP基因对卵及卵巢蛋白表达的影响
    5.1 实验试剂、材料与设备
        5.1.1 供试果蝇
        5.1.2 实验仪器与药品
    5.2 实验方法
        5.2.1 果蝇卵总蛋白蛋白电泳分离
        5.2.2 果蝇卵巢总蛋白电泳分离
        5.2.3 果蝇卵巢总蛋白测序分析
    5.3 实验结果与分析
        5.3.1 CP基因对卵蛋白表达的影响
        5.3.2 CP基因对果蝇卵巢总蛋白的影响
        5.3.3 卵蛋白测序
    5.4 讨论
6 CP基因对果蝇化蛹、羽化及寿命的影响
    6.1 实验材料与仪器设备
        6.1.1 供试果蝇
    6.2 实验方法
        6.2.1 CP基因RNAi品系化蛹实验
        6.2.2 CP基因RNAi品系羽化实验
        6.2.3 CP基因RNAi品系寿命实验
    6.3 实验数据处理
    6.4 实验结果与分析
        6.4.1 CP基因对果蝇化蛹率及羽化率的影响
        6.4.2 CP基因对果蝇化蛹及羽化时间的影响
        6.4.3 CP基因对果蝇寿命的影响
    6.5 讨论
7 结论、创新点与展望
    7.1 结论
    7.2 创新点
    7.3 展望
作者简历
参考文献



本文编号：3950961