棉花抗枯萎病相关基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析

发布时间：2024-04-12 22:52

　　目的:棉花枯萎病是影响我国棉花产量和品质的最重要病害之一,挖掘抗病相关基因是利用转基因技术培育棉花抗枯萎病品种的基础。植物转录因子在抗病信号途径中起着重要作用,其中WRKY转录因子在植物抗病中必不可少的。本实验是从陆地棉抗病材料中克隆棉花抗枯萎病相关WRKY转录因子基因Gh WRKY48,分析该基因的表达特性,并初步研究其功能,为棉花抗枯萎病分子育种提供基因资源。方法:本实验以枯萎病菌诱导棉花根部基因表达谱中筛选得到WRKY基因片段为探针,通过电子克隆技术从高抗枯萎病的陆地棉中克隆WRKY转录因子基因Gh WRKY48。通过实时荧光定量PCR分析Gh WRKY48基因在枯萎病菌、水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)、乙烯(ET)胁迫下的表达方式;利用VIGS沉默技术初步研究该基因功能。结果:1、从抗病棉花品种“中棉所12”号根部c DNA中克隆得到一个抗枯萎病相关的WRKY转录因子。通过多序列比对分析该基因属于第Ⅱ类WRKY转录因子家族,将其命名为Gh WRKY48。序列分析发现,该基因c DNA全长为1074个核苷酸,编码了357个氨基酸,含有1个WRKY结构域及1个C2H2型锌指结构。2...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1VIGS技术的机制图（引用）

棉花抗枯萎病相关基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析8图1VIGS技术的机制图（引用）Figure1MechanismofVIGStechnology(Reference)1.5.2VIGS载体病毒VIGS载体有DNA病毒改造、RNA病毒改造和卫星病毒改造这三种类型。它们分别....

图2生物信息学分析件Figure.2Bioinformaticsanalysissoftware

棉花抗枯萎病相关基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析在Cottongen数据库和NCBI数据库的基础上，利用生物信息学的一系列软件分析GhWRKY48基因的开放阅读区、蛋白质的理化性质、蛋白质的结构和磷酸化位点等，用MEGA5.05软件进行进化树分析，用....

图3.GhWRKY48基因的PCR产物、pMD19-T-GhWRKY48酶切产物和GhWRKY48基

棉花抗枯萎病相关基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析24凝胶电泳中检测，扩增一条清晰的条带，与预期的结果1074bp条带大小相似（图3A），胶回收目的片段后与克隆载体pMD19-T连接，获得pMD19-T-GhWRKY48重组质粒，转化大肠杆菌，经过PCR和KpnI与BamH....

图4.A:同源基因不同植物的氨基酸序列比对（“-”：WRKY保守域“▲”：锌指结构）;B:GhWRKY48与同源基因的氨基酸序列的进化树

棉花抗枯萎病相关基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析26B图4.A:同源基因不同植物的氨基酸序列比对（“-”：WRKY保守域“▲”：锌指结构）;B:GhWRKY48与同源基因的氨基酸序列的进化树Figure4.A:Comparisonofaminoacidsequenceso....

本文编号：3952093