低温脂肪酶基因的克

发布时间：2024-04-19 03:19

　　脂肪酶是一种特殊的甘油三酯水解酶,其作用条件温和、副产物少、可作用于油-水界面催化甘油酯水解成脂肪酸和甘油,还能催化水解、酯交换、酯化、醇解、酸解和氨解多种反应。低温脂肪酶是指在0oC仍具有一定催化活性、最适温度不超过30oC的脂肪酶,大多数在高温条件下酶活力较差。低温脂肪酶还具有一定有机溶剂耐受性、偏好C3^C10长链的脂肪酸酯以及具有更宽泛的pH适用范围,因此低温脂肪酶在水产饲料、食品、生物医药、皮革、环境治理、生物柴油、洗涤等行业有较大的应用前景。据报道,假单胞菌属(Pseudomonas)和气单胞菌属(Aeromonas)是低温脂肪酶的主要来源。为了拓宽低温脂肪酶的基因资源,本论文从微生物中克隆、表达三个脂肪酶基因,获得的重组蛋白分别命名为PgLip、PfLip和BcLip,分别来源于谷关假单胞菌(Pseudomonas guguanensis)、台湾假单胞菌(Pseudomonas formosensis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus clausii)。酶学性质测定表明,PgLip、PfLip和BcLip最适温度均在20oC以下,在0oC仍具有较高的酶...

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
    1.1 脂肪酶概述
        1.1.1 脂肪酶来源
        1.1.2 脂肪酶分类与分子结构
        1.1.3 脂肪酶性质
        1.1.4 脂肪酶的应用
    1.2 低温脂肪酶
        1.2.1 低温脂肪酶的特征
        1.2.2 低温脂肪酶的研究意义
        1.2.3 低温脂肪酶的应用前景
    1.3 宏基因组学
        1.3.1 基因的获得
        1.3.2 宏基因组文库的构建
        1.3.3 宏基因组文库的筛选
    1.4 生物传感器
    1.5 研究意义
第二章 低温脂肪酶基因的克隆、表达和生化表征
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株、载体、质粒、试剂、培养基和实验仪器
        2.1.2 引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 克劳氏芽孢杆菌基因组DNA的提取
        2.2.2 脂肪酶基因的获取
        2.2.3 表达载体的构建
        2.2.4 脂肪酶基因的重组表达
        2.2.5 重组脂肪酶的纯化
        2.2.6 蛋白浓度测定
        2.2.7 脂肪酶的酶学性质
        2.2.8 脂肪酶的生化表征
    2.3 结果与分析
        2.3.1 假单胞菌的分析
        2.3.2 BcLip基因的克隆、表达和生化表征
        2.3.3 PfLip的克隆、表达和生化表征
        2.3.4 PgLip的克隆、表达和生化表征
    2.4 讨论
第三章 高通量筛选脂肪酶基因方法的初步建立
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株、载体、试剂、仪器及培养基
        3.1.2 本章所有引物
    3.2 实验方法
        3.2.1 fadE基因的敲除
        3.2.2 针对脂肪酶高通量筛选系统的构建
        3.2.3 针对脂肪酶高通量筛选系统的验证
    3.3 结果与分析
        3.3.1 fadE基因的敲除
    3.4 讨论
第四章 脂肪酶高通量筛选方法的初步应用
    4.1 实验材料
        4.1.1 菌株、载体、试剂、仪器及培养基
        4.1.2 引物
    4.2 实验方法
        4.2.1 土壤宏基因组的构建
        4.2.2 高通量筛选土壤宏基因组文库
    4.3 结果与分析
        4.3.1 土壤微生物宏基因组DNA的提取
        4.3.2 土壤宏基因组DNA酶切效果比较
        4.3.3 土壤宏基因组的酶切和回收
        4.3.4 用于构建土壤文库p AR-Ds Red-Amp载体质粒
        4.3.5 连接、转化以构建土壤宏基因组文库
        4.3.6 高通量筛选土壤宏基因组文库
    4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3958152